Single-step method for β-galactosidase assays in Escherichia coli using a 96-well microplate reader.
Single-step method for β-galactosidase assays in Escherichia coli using a 96-well microplate reader.
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DOI：
10.1016/j.ab.2016.03.017
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发表时间：
2016-06-15
影响因子：
2.9
通讯作者：
Buck M
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Schaefer J;Jovanovic G;Kotta-Loizou I;Buck M
历史上，lacZ基因是分子生物学中最普遍使用的基因表达报告基因之一。其活性可使用人工底物邻硝基苯基-β-d-吡喃半乳糖苷（ONPG）定量。然而，用于测量LacZ活性的传统方法（首先由J. H.米勒在1972年）对于大量的样品可能是具有挑战性的，易于变化，并且涉及用于裂解的有害化合物（例如，氯仿、甲苯）。在这里，我们描述了一个单步测定使用96孔酶标仪与一个经过验证的替代细胞透化方法。这一修改后的协议减少了90%的处理时间。
Historically, the lacZ gene is one of the most universally used reporters of gene expression in molecular biology. Its activity can be quantified using an artificial substrate, o-nitrophenyl-ß-d-galactopyranoside (ONPG). However, the traditional method for measuring LacZ activity (first described by J. H. Miller in 1972) can be challenging for a large number of samples, is prone to variability, and involves hazardous compounds for lysis (e.g., chloroform, toluene). Here we describe a single-step assay using a 96-well microplate reader with a proven alternative cell permeabilization method. This modified protocol reduces handling time by 90%.