Functional analysis of H. sapiens DNA polymerase gamma spacer mutation W748S with and without common variant E1143G.
Functional analysis of H. sapiens DNA polymerase gamma spacer mutation W748S with and without common variant E1143G.
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具有和不具有常见变异 E1143G 的智人 DNA 聚合酶 γ 间隔区突变 W748S 的功能分析。
DOI：
10.1016/j.bbadis.2010.02.003
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发表时间：
2010
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Kaguni,LaurieS
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Palin,EinoJH;Lesonen,Annamari;Farr,CarolL;Euro,Liliya;Suomalainen,Anu;Kaguni,LaurieS
线粒体 DNA 聚合酶 POLG 是在动物线粒体中发现的唯一 DNA 聚合酶。在人类中，带有 E1143G 突变的顺式 POLGα W748S 与一种新型隐性共济失调 MIRAS 相关，这是芬兰最常见的遗传性共济失调。我们使用重组人 POLG 研究了 W748S 氨基酸变化的生化表型。我们测量了持续性和非持续性 DNA 聚合酶活性、DNA 结合亲和力、酶持续性以及与重组 POLGβ 的亚基相互作用。此外，我们使用逆转录病毒转导研究了原代人类细胞培养物中 W748S 和 E1143G 突变的影响。在这里，我们检查了细胞活力、线粒体 DNA 拷贝数和线粒体翻译产物。我们的结果表明，W748S 突变体 POLGα 没有表现出明确的生化表型，使其与野生型 POLGα 无法区分，因此无法复制先前发表的结果。此外，细胞模型的结果与患者的结果一致，支持我们的生化发现。
Mitochondrial DNA polymerase, POLG, is the sole DNA polymerase found in animal mitochondria. In humans, POLGα W748S in cis with an E1143G mutation has been linked to a new type of recessive ataxia, MIRAS, which is the most common inherited ataxia in Finland. We investigated the biochemical phenotypes of the W748S amino acid change, using recombinant human POLG. We measured processive and non-processive DNA polymerase activity, DNA binding affinity, enzyme processivity, and subunit interaction with recombinant POLGβ. In addition, we studied the effects of the W748S and E1143G mutations in primary human cell cultures using retroviral transduction. Here, we examined cell viability, mitochondrial DNA copy number, and products of mitochondrial translation. Our results indicate that the W748S mutant POLGα does not exhibit a clear biochemical phenotype, making it indistinguishable from wild type POLGα and as such, fail to replicate previously published results. Furthermore, results from the cell models were concurrent with the findings from patients, and support our biochemical findings.