Combined AFM and super-resolution localisation microscopy: Investigating the structure and dynamics of podosomes.
Combined AFM and super-resolution localisation microscopy: Investigating the structure and dynamics of podosomes.
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DOI：
10.1016/j.ejcb.2020.151106
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发表时间：
2020-09
影响因子：
6.6
通讯作者：
Cox S
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Hirvonen LM;Marsh RJ;Jones GE;Cox S
足小体是一种机械敏感的附着/侵袭结构，形成于细胞的基质-粘附界面上，并伸入细胞外基质进行探测和重塑。尽管它们在许多细胞过程中起着核心作用，但它们的确切分子结构和功能仅被部分了解。我们回顾了最近在足小体结构的分子尺度成像方面的进展，包括我们新开发的定位显微镜技术，称为HAWK，它可以实现无伪影的活细胞环蛋白超分辨率显微镜，并报告了在一个装置上结合荧光定位显微镜（STORM/PALM）和原子力显微镜（AFM）的新结果，其中定位显微镜提供了荧光标记的足小体成分的位置和动力学。同时利用AFM对结构刚度的空间变化进行映射。对于双色定位显微镜，我们将iFluor-647与光切换蛋白mEOS3.2结合起来，iFluor-647先前已被证明可以消除在成像模式之间改变缓冲的需要，mEOS3.2也可以实现活细胞成像。
Podosomes are mechanosensitive attachment/invasion structures that form on the matrix-adhesion interface of cells and protrude into the extracellular matrix to probe and remodel. Despite their central role in many cellular processes, their exact molecular structure and function remain only partially understood. We review recent progress in molecular scale imaging of podosome architecture, including our newly developed localisation microscopy technique termed HAWK which enables artefact-free live-cell super-resolution microscopy of podosome ring proteins, and report new results on combining fluorescence localisation microscopy (STORM/PALM) and atomic force microscopy (AFM) on one setup, where localisation microscopy provides the location and dynamics of fluorescently labelled podosome components, while the spatial variation of stiffness is mapped with AFM. For two-colour localisation microscopy we combine iFluor-647, which has previously been shown to eliminate the need to change buffer between imaging modes, with the photoswitchable protein mEOS3.2, which also enables live cell imaging.
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