Targeted repression of AXIN2 and MYC gene expression using designer TALEs.
Targeted repression of AXIN2 and MYC gene expression using designer TALEs.
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使用设计 TALE 靶向抑制 AXIN2 和 MYC 基因表达。
DOI：
10.1016/j.bbrc.2014.03.077
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发表时间：
2014
影响因子：
3.1
通讯作者：
Yochum,GregoryS
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Rennoll,SherriA;Scott,SamanthaA;Yochum,GregoryS
设计因子（dTALEs）是嵌合转录因子，可以在哺乳动物细胞中调节基因表达。然而，dTALEs是否能够阻断信号转导级联下游的基因转录，尚未得到充分的探讨。在这里，我们测试了dTALEs是否可以用于靶向由Wnt/β-catenin信号传导控制表达的基因。TALE DNA结合域被设计为识别Wnt响应增强子元件（WREs）附近的序列，WREs控制轴抑制蛋白2（AXIN2）和c-MYC（MYC）的表达。这些自定义DNA结合域与mSin3A相互作用域（SID）连接，生成TALE-SID嵌合阻遏子。TALE-SIDs抑制荧光素酶报告活性，结合其基因组靶点，抑制HEK293细胞中daxin2和myc的表达。我们生成了一种新的HEK293细胞系，以确定TALE-SIDs是否可以在致癌Wnt/β-catenin信号传导的下游发挥作用。用多西环素和他莫昔芬治疗这些细胞可以刺激在结直肠癌亚群中发现的稳定形式β-连环蛋白的核积累。在这些细胞中，TALE-SIDs抑制daxin2和myc的表达，这表明dTALEs可能为治疗结直肠癌提供一种有效的治疗策略。
Designer TALEs (dTALEs) are chimeric transcription factors that can be engineered to regulate gene expression in mammalian cells. Whether dTALEs can block gene transcription downstream of signal transduction cascades, however, has yet to be fully explored. Here we tested whether dTALEs can be used to target genes whose expression is controlled by Wnt/β-catenin signaling. TALE DNA binding domains were engineered to recognize sequences adjacent to Wnt responsive enhancer elements (WREs) that control expression ofaxis inhibition protein 2(AXIN2) andc-MYC(MYC). These custom DNA binding domains were linked to the mSin3A interaction domain (SID) to generate TALE–SID chimeric repressors. The TALE–SIDs repressed luciferase reporter activity, bound their genomic target sites, and repressedAXIN2andMYCexpression in HEK293 cells. We generated a novel HEK293 cell line to determine whether the TALE–SIDs could function downstream of oncogenic Wnt/β-catenin signaling. Treating these cells with doxycycline and tamoxifen stimulates nuclear accumulation of a stabilized form of β-catenin found in a subset of colorectal cancers. The TALE–SIDs repressedAXIN2andMYCexpression in these cells, which suggests that dTALEs could offer an effective therapeutic strategy for the treatment of colorectal cancer.
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