Interaction of complement proteins C5b-6 and C5b-7 with phospholipid vesicles: effects of phospholipid structural features.
Interaction of complement proteins C5b-6 and C5b-7 with phospholipid vesicles: effects of phospholipid structural features.
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补体蛋白 C5b-6 和 C5b-7 与磷脂囊泡的相互作用：磷脂结构特征的影响。
DOI：
10.1021/bi00371a065
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发表时间：
1986
期刊：
影响因子：
2.9
通讯作者：
Nelsestuen,GL
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Silversmith,RE;Nelsestuen,GL
材料和方法蛋白质。补体成分 C5b-6 (Silversmith & Nelsestuen, 1986a)、C7 (Podack et al., 1979b)、C8 (Steckel et al., 1980) 和 C9 (Biesecker & Muller-Eberhard, 1980) 按照所述从人血浆中纯化。囊泡。所有囊泡均用高度纯化的磷脂制备。 PC（蛋黄）、PI（大豆）、PS（牛脑）、PG（蛋黄 PC 衍生物）、PA（蛋黄 PC 衍生物）和 DOPC（合成）购自密苏里州圣路易斯的 Sigma Chemical Co.。 DMPC 和 DPPC 购自阿拉巴马州伯明翰的 Avanti Polar Lipids。如所述（Silversmith & Nelsestuen，1986a），通过超声处理和 Sepharose 4B 上的凝胶过滤制备内部截留有 200 mM 5 (6)-羧基荧光素 (6CF) 的小单层囊泡。通过三种不同的方法制备不含荧光探针的囊泡，以获得具有各种大小和磷脂组成的囊泡群体。对于可溶于乙醇的磷脂（PG、PC、DMPC、DOPC 和 DPPC），通过乙醇注射的方法制备小单层囊泡（Kremer 等，1977）。简而言之，将 1 mg 磷脂在 N2 气流下干燥，溶解在 0.5 mL 无水乙醇中，并以 5 μ 份注射到 25°C 搅拌的 Tris 缓冲液中。对于由 DPPC 组成的囊泡，在注射过程中将 Tris 缓冲液加热至 55°C（高于 DPPC 的流体到固相转变温度，41°C）。
Materials and MethodsProteins. Complement components C5b-6 (Silversmith & Nelsestuen, 1986a), C7 (Podack et al., 1979b), C8 (Steckel et al., 1980), and C9 (Biesecker & Muller-Eberhard, 1980) were purified from human plasma as described. Vesicles. All vesicles were prepared with highly purified phospholipids. PC (egg yolk), PI (soybean), PS (bovine brain), PG (derivative of egg yolk PC), PA (derivative of egg yolk PC), and DOPC (synthetic) were purchased from the Sigma Chemical Co., St. Louis, MO. DMPC and DPPC were purchased from Avanti Polar Lipids, Birmingham, AL. Small unilamellar vesicles with 200 mM 5 (6)-carboxyfluorescein (6CF) trapped in the interior were prepared by sonication and gel filtration on Sepharose 4B as described (Silversmith & Nelsestuen, 1986a). Vesicles without the fluorescent probe were prepared by three different methods to obtain vesicle populations with a variety of sizes and phospholipid compositions. For phos-pholipids that were soluble in ethanol (PG, PC, DMPC, DOPC, and DPPC), small unilamellar vesicles were prepared by the method of ethanol injection (Kremer et al., 1977). Briefly, 1 mg of phospholipid was dried under a stream of N2, dissolved in 0.5 mL of absolute ethanol, and injected in 5 µ portions into stirring Tris buffer at 25 C. For vesicles com-posed of DPPC, the Tris buffer was warmed to 55 C during injection (above the fluid to solid phase transition temperature of DPPC, 41 C).
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