Dynamics of the internalization of phosphodiester oligodeoxynucleotides in HL60 cells.
Dynamics of the internalization of phosphodiester oligodeoxynucleotides in HL60 cells.
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HL60 细胞中磷酸二酯寡脱氧核苷酸内化的动态。
作者：
C. Stein;J. Tonkinson;L. M. Zhang;L. Yakubov;J. Gervasoni;R. Taub;S. Rotenberg
我们研究了磷酸二酯 (PO) 寡脱氧核苷酸 (oligos) 与 HL60 细胞的细胞关联和内化。在 4 摄氏度下，胸苷 (FOdT15) 的 15 聚体 PO 均聚物表现出明显的饱和结合 (Km = 22 +/- 1 nM)，与硫代磷酸酯 (PS) 寡核苷酸的结合具有竞争性。 SdC28（胞苷的 PS 28 聚体均聚物）的 Kc 值为 5 +/- 2 nM。 SdC28 用于剥离细胞表面荧光：内化荧光以（浓度）（时间）依赖性方式积累，与胞饮机制一致。 PS 以及 PO 寡核苷酸在较小程度上抑制了荧光白蛋白的内化速率，荧光白蛋白也是胞饮作用的标志物。这与 PS 和 PO 寡核苷酸在体外直接抑制蛋白激酶 C (PKC) beta 1 相关。此外，其他 PKC 抑制剂（H7、星形孢菌素、DMSO、PKC 假底物多肽）也可能通过刺激胞吐速率来抑制细胞内胞饮物质的积累。在 HL60 细胞中，带电寡核苷酸的胞饮内化似乎依赖于完整的 PKC 激酶活性，该活性在体外被 PS 和 PO 寡核苷酸抑制。
We have examined the cellular association and internalization of phosphodiester (PO) oligodeoxynucleotides (oligos) with HL60 cells. At 4 degrees C, a 15-mer PO homopolymer of thymidine (FOdT15) exhibits apparent saturation binding (Km = 22 +/- 1 nM) that is competitive with the binding of phosphorothioate (PS) oligos. The value of Kc for SdC28, a PS 28-mer homopolymer of cytidine, is 5 +/- 2 nM. SdC28 was used to strip cell surface fluorescence: Internalized fluorescence accumulated in a (concentration)(time)-dependent fashion, consistent with a pinocytotic mechanism. PS, and to a lesser extent, PO oligos inhibited the rate of internalization of fluorescent albumin, also a marker of pinocytosis. This was correlated with direct in vitro inhibition of protein kinase C (PKC) beta 1 by the PS and PO oligos. Furthermore, other PKC inhibitors (H7, staurosporine, DMSO, PKC pseudosubstrate polypeptide) also inhibited intracellular accumulation of pinocytosed materials, perhaps by stimulating the exocytosis rate. In HL60 cells, the pinocytotic internalization of charged oligos appears to be dependent on intact PKC kinase activity, which is inhibited in vitro by PS and PO oligos.
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