Modeling Paracrine Noncanonical Wnt Signaling In Vitro.
Modeling Paracrine Noncanonical Wnt Signaling In Vitro.
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DOI：
10.3791/63247
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发表时间：
2021-12-10
影响因子：
1.2
通讯作者：
Kumar, S. Ram
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Toubat, Omar;Choi, Jongkyu;Kumar, S. Ram
非经典 Wnt 信号传导在胚胎发生过程中调节细胞内肌动蛋白丝组织和祖细胞的极化迁移。这个过程需要信号发送细胞和信号接收细胞之间复杂且协调的旁分泌相互作用。鉴于这些相互作用可能发生在来自不同谱系的各种类型的细胞之间，因此对细胞特异性缺陷的体内评估可能具有挑战性。本研究描述了一种高度可重复的方法来评估体外旁分泌非经典 Wnt 信号传导。该协议的设计能够（1）对任何两种感兴趣的细胞类型之间的非规范 Wnt 信号传导进行功能和分子评估； (2) 剖析非经典Wnt信号通路中信号发送分子与信号接收分子的作用； (3) 使用标准分子或药理学方法进行表型拯救实验。该协议用于评估成肌细胞中神经嵴细胞 (NCC) 介导的非经典 Wnt 信号传导。 NCC 的存在与成肌细胞中鬼笔环肽阳性细胞质丝状伪足和片状伪足数量的增加以及伤口愈合试验中成肌细胞迁移的改善有关。 Wnt5a-ROR2 轴被确定为 NCC 和第二心区 (SHF) 心肌细胞祖细胞之间的关键非典型 Wnt 信号通路。总之，这是一种在体外研究旁分泌非典型 Wnt 信号传导机制的高度易于处理的方案。
Noncanonical Wnt signaling regulates intracellular actin filament organization and polarized migration of progenitor cells during embryogenesis. This process requires complex and coordinated paracrine interactions between signal-sending and signal-receiving cells. Given that these interactions can occur between various types of cells from different lineages, in vivo evaluation of cell-specific defects can be challenging. The present study describes a highly reproducible method to evaluate paracrine noncanonical Wnt signaling in vitro. This protocol was designed with the ability to (1) conduct functional and molecular assessments of noncanonical Wnt signaling between any two cell types of interest; (2) dissect the role of signal-sending versus signal-receiving molecules in the noncanonical Wnt signaling pathway; and (3) perform phenotypic rescue experiments with standard molecular or pharmacologic approaches. This protocol was used to evaluate neural crest cell (NCC)-mediated noncanonical Wnt signaling in myoblasts. The presence of NCCs is associated with an increased number of phalloidin-positive cytoplasmic filopodia and lamellipodia in myoblasts and improved myoblast migration in a wound-healing assay. The Wnt5a-ROR2 axis was identified as a crucial noncanonical Wnt signaling pathway between NCC and second heart field (SHF) cardiomyoblast progenitors. In conclusion, this is a highly tractable protocol to study paracrine noncanonical Wnt signaling mechanisms in vitro.
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影响因子：
16.6
作者：
Avgustinova A;Iravani M;Robertson D;Fearns A;Gao Q;Klingbeil P;Hanby AM;Speirs V;Sahai E;Calvo F;Isacke CM
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Isacke CM
影响因子：
4.6
作者：
Kodo K;Shibata S;Miyagawa-Tomita S;Ong SG;Takahashi H;Kume T;Okano H;Matsuoka R;Yamagishi H
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作者：
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Shi DL
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作者：
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Martin-Belmonte, Fernando
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作者：
Bradshaw, Lucy;Chaudhry, Bill;Henderson, Deborah J.
通讯作者：
Henderson, Deborah J.