Assembly of custom TALE-type DNA binding domains by modular cloning.
Assembly of custom TALE-type DNA binding domains by modular cloning.
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DOI：
10.1093/nar/gkr151
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发表时间：
2011-07
影响因子：
14.9
通讯作者：
Lahaye T
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Morbitzer R;Elsaesser J;Hausner J;Lahaye T
转录激活因子样效应物（TALE）DNA结合蛋白显示出作为靶向结合任何所需DNA序列的分子工具的巨大潜力。它们的DNA结合结构域由串联排列的重复序列组成，并且由于这种重复结构，生成具有用户定义特异性的设计者TALE（dTALE）具有挑战性。我们提出了一种克隆方法，有利于组装多个重复编码的DNA片段，翻译成dTALE与预定义的DNA结合特异性。该方法在两个连续的切割连接酶反应中使用IIS型限制酶来构建dTALE重复序列阵列。我们采用这种模块化方法来产生dTALE，该dTALE区分两个高度相似的DNA序列，这两个DNA序列都被黄单胞菌TALE AvrBs3靶向。这些数据表明，这种模块化组装系统允许快速产生靶向预定长度和序列的结合位点的高度特异性TALE型DNA结合结构域。这种方法能够在常规和高通量应用中快速灵活地生产用于基因调控和基因组编辑的dTALE。
Transcription activator-like effector (TALE) DNA binding proteins show tremendous potential as molecular tools for targeted binding to any desired DNA sequence. Their DNA binding domain consists of tandem arranged repeats, and due to this repetitive structure it is challenging to generate designer TALEs (dTALEs) with user-defined specificity. We present a cloning approach that facilitates the assembly of multiple repeat-encoding DNA fragments that translate into dTALEs with pre-defined DNA binding specificity. This method makes use of type IIS restriction enzymes in two sequential cut-ligase reactions to build dTALE repeat arrays. We employed this modular approach for generation of a dTALE that differentiates between two highly similar DNA sequences that are both targeted by the Xanthomonas TALE, AvrBs3. These data show that this modular assembly system allows rapid generation of highly specific TALE-type DNA binding domains that target binding sites of predefined length and sequence. This approach enables the rapid and flexible production of dTALEs for gene regulation and genome editing in routine and high-throughput applications.
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影响因子：
3.7
作者：
Engler, Carola;Kandzia, Romy;Marillonnet, Sylvestre
通讯作者：
Marillonnet, Sylvestre
影响因子：
46.9
作者：
通讯作者：
--
影响因子：
14.9
作者：
Li T;Huang S;Jiang WZ;Wright D;Spalding MH;Weeks DP;Yang B
通讯作者：
Yang B
DOI：
10.1073/pnas.0701742104
发表时间：
2007-06-19
影响因子：
11.1
作者：
Sugio, Akiko;Yang, Bing;White, Frank F.
通讯作者：
White, Frank F.
DOI：
10.1073/pnas.1019533108
发表时间：
2011-02-08
影响因子：
11.1
作者：
Mahfouz, Magdy M.;Li, Lixin;Zhu, Jian-Kang
通讯作者：
Zhu, Jian-Kang