Covalent crosslinking analysis of angiotensin receptors on differentiated NG108-15 cells.
Covalent crosslinking analysis of angiotensin receptors on differentiated NG108-15 cells.
复制标题
分化的 NG108-15 细胞上血管紧张素受体的共价交联分析。
DOI：
10.1016/0006-291x(90)90505-h
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发表时间：
1990
影响因子：
3.1
通讯作者：
Weyhenmeyer,JA
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Carrithers,MD;Koide,KA;Raman,VK;Masuda,S;Weyhenmeyer,JA
神经母细胞瘤×神经胶质瘤杂交细胞（NG108-15）被用作模型系统，通过共价交联分析来表征神经元-胶质型血管紧张素（ANG）受体。用 1.5% DMSO 和 0.5% 胎牛血清分化四到五天后，饱和度分析显示单个高亲和力位点，K d= 1.35±0.42 nM，B max= 468±106 fmol/mg 蛋白质。使用同型双功能交联试剂双（磺基琥珀酰亚胺基）辛二酸酯（BS 3），用 125 I-ANG II 特异性标记估计 M r 为 78 kDa 的位点（通过 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定）。 ANG II 和 ANG III (10−6 M) 均抑制特异性标记。通过药理学分析 (K i= 3.33±0.98 nM) 和凝胶密度分析 (K i= 2.65±0.32 nM) 分析，ANG III 结合的 K i 相似。我们得出的结论是，78 kDa 蛋白代表了高亲和力 ANG 结合位点，对 ANG II 和 ANG III 具有相似的亲和力。
Neuroblastoma× glioma hybrid cells (NG108-15) were used as a model system to characterize neuronal-glial type angiotensin (ANG) receptors by covalent crosslinking analysis. After differentiation with 1.5% DMSO and 0.5% fetal bovine serum for four to five days, saturation analysis revealed a single high affinity site with a K d= 1.35±0.42 nM and a B max= 468±106 fmol/mg protein. Using the homobifunctional crosslinking reagent bis (sulfosuccinimidyl) suberate (BS 3), a site with an estimated M r of 78 kDa was specifically labeled with 125 I-ANG II as determined by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. Both ANG II and ANG III (10− 6 M) inhibited specific labeling. The K i for ANG III binding was similar by both pharmacologic (K i= 3.33±0.98 nM) and gel densitometric (K i= 2.65±0.32 nM) analyses. We conclude that the 78 kDa protein represents a high affinity ANG binding site with similar affinities for both ANG II and ANG III.
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