Wide-pore silica-based ether-bonded phases for separation of proteins by high-performance hydrophobic-interaction and size-exclusion chromatography.
Wide-pore silica-based ether-bonded phases for separation of proteins by high-performance hydrophobic-interaction and size-exclusion chromatography.
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大孔二氧化硅基醚键合相，用于通过高性能疏水相互作用和尺寸排阻色谱分离蛋白质。
DOI：
10.1016/s0021-9673(00)96180-6
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发表时间：
1984
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Karger,BL
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Miller,NT;Feibush,B;Karger,BL
本文研究了在温和的洗脱条件下使用宽孔硅胶基亲水醚键合相进行蛋白质的色谱分离。特别地，已经制备了以下结构的醚相：Si-（CH 2）3-O-（CH 2-CH 2-O）n-R，其中n = 1、2、3和R =甲基、乙基或正丁基。根据移动的相条件，这些相可用于高效疏水相互作用色谱或尺寸排阻色谱。在疏水相互作用模式中，降低盐浓度的梯度，例如，从3 M硫酸铵（pH 6.0，25°C），产生具有活性蛋白质的高质量回收率的尖锐峰。在这种模式下，保留时间可以通过盐的类型和浓度以及柱温来控制。在尺寸排阻模式中，使用中等离子强度，例如，0.5 M乙酸铵（pH 6.0）产生log（MW[n]）与保留体积的线性校准。即使在0.05M盐浓度下，也没有观察到固定相电荷对蛋白质洗脱的影响。这些键合相色谱柱表现出良好的柱间重现性和连续使用至少5个月的恒定保留。在这两种模式下的蛋白质的高性能分离的例子进行了说明。
This paper examines the use of wide-pore silica-based hydrophilic ether-bonded phases for the chromatographic separation of proteins under mild elution conditions. In particular, ether phases of the following structure Si-(CH2)3-O-(CH2-CH2-O)n-R, wheren 1, 2, 3 and R methyl, ethyl orn-butyl, have been prepared. These phases can be employed either in high-performance hydrophobic-interaction or size-exclusion chromatography, depending on mobile phase conditions. In the hydrophobic-interaction mode, a gradient of decreasing salt concentration,e.g., from 3Mammonium sulfate (pH 6.0, 25°C), yields sharp peaks with high mass recovery of active proteins. In this mode, retention can be controlled by salt type and concentration, as well as by column temperature. In the size-exclusion mode, use of medium ionic strength,e.g., 0.5Mammonium acetate (pH 6.0) yields linear calibration of log (MW[n]) vs. retention volume. Even at 0.05Msalt concentration, no stationary phase charge effects on protein elution are observed. These bonded-phase columns exhibit good column-to-column reproducibility and constant retention for at least five months of continual use. Examples of the high-performance separation of proteins in both modes are illustrated.
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