Tailor-Made Ezrin Actin Binding Domain to Probe Its Interaction with Actin In-Vitro
Tailor-Made Ezrin Actin Binding Domain to Probe Its Interaction with Actin In-Vitro
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定制 Ezrin 肌动蛋白结合域，以在体外探测其与肌动蛋白的相互作用
作者：
Rohini Shrivastava;D. Köster;Sheetal Kalme;S. Mayor;Muniasamy Neerathilingam
Ezrin是ERM（Ezrin/Radixin/Moesin）蛋白家族的成员，是介导细胞完整性和功能的肌动蛋白-质膜连接蛋白。这种相互作用的体内研究是一项复杂的任务，因为存在大量的内源性结合伴侣的Ezrin和肌动蛋白。此外，全长Ezrin的C-末端肌动蛋白结合能力天然地被其N-末端屏蔽，并且仅在磷脂酰肌醇二磷酸（PIP 2）或C-末端苏氨酸磷酸化的存在下才具有活性。在这里，我们展示了一种策略的设计，表达和纯化的结构，结合埃兹蛋白C-末端肌动蛋白结合结构域，功能元件，如融合标签和荧光标签，以促进纯化和荧光显微镜为基础的研究。基于计算机模拟，首次将内部His标签用于Ezrin肌动蛋白结合结构域的纯化。通过使用全内反射荧光显微术成功地证明了这些构建体的功能性（埃兹蛋白-肌动蛋白相互作用）。这种设计也可以扩展到企业风险管理家族的其他成员。
Ezrin, a member of the ERM (Ezrin/Radixin/Moesin) protein family, is an Actin-plasma membrane linker protein mediating cellular integrity and function. In-vivo study of such interactions is a complex task due to the presence of a large number of endogenous binding partners for both Ezrin and Actin. Further, C-terminal actin binding capacity of the full length Ezrin is naturally shielded by its N-terminal, and only rendered active in the presence of Phosphatidylinositol bisphosphate (PIP2) or phosphorylation at the C-terminal threonine. Here, we demonstrate a strategy for the design, expression and purification of constructs, combining the Ezrin C-terminal actin binding domain, with functional elements such as fusion tags and fluorescence tags to facilitate purification and fluorescence microscopy based studies. For the first time, internal His tag was employed for purification of Ezrin actin binding domain based on in-silico modeling. The functionality (Ezrin-actin interaction) of these constructs was successfully demonstrated by using Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy. This design can be extended to other members of the ERM family as well.
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Ezrin：一种需要构象激活才能将微丝与细胞表面结构组装中的质膜连接起来的蛋白质。
影响因子：
4
作者：
Bretscher,A;Reczek,D;Berryman,M
通讯作者：
Berryman,M
影响因子：
3.9
作者：
Nye, Jeffrey A.;Groves, Jay T.
通讯作者：
Groves, Jay T.
影响因子：
3.3
作者：
GARY, R;BRETSCHER, A
通讯作者：
BRETSCHER, A
活果蝇胚胎中微管和肌动蛋白丝的行为。
DOI：
10.1242/dev.103.4.675
发表时间：
1988
期刊：
Development (Cambridge, England)
影响因子：
--
作者：
Kellogg,DR;Mitchison,TJ;Alberts,BM
通讯作者：
Alberts,BM