Einzelmolekülstudien zur linearen Diffusion von sequenzspezifischen Endonukleasen

序列特异性核酸内切酶线性扩散的单分子研究

• 批准号: 139757024
• 负责人: Dr. Wolfgang Wende
• 金额: --
• 依托单位: Institut für Biochemie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2008-12-31 至 2012-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/139757024?language=en
• 关键词: Einzelmolek; lstudien; zur; linearen; Diffusion

Proteine, die spezifische Sequenzen auf der DNA im hohen Überschuss unspezifischer Sequenzen erkennen müssen, sind meist auf besondere Mechanismen angewiesen, um diese ausreichend schnell, entsprechend den biologischen Anforderungen, zu finden. Für diese sogenannte erleichterte Diffusion wird der 3D-Suchprozess durch eine 1D-Komponente ergänzt, bei dem das Protein über weite Strecken im Kontakt mit der DNA bleibt. Untersuchungen zum Mechanismus der erleichterte Diffusion wurden in der Vergangenheit überwiegend durch konventionelle kinetische Analysen durchgeführt, die aber einige zentrale Fragen nicht klären konnten. Insbesondere blieb unklar, zu welchen Anteilen sliding, hopping oder jumping zu dem Suchprozess beitragen, ob das Protein beim sliding der helikalen Struktur der DNA folgt, ob sliding kontinuierlich, d.h. ohne Pausen, abläuft, und schließlich, wieweit es durch die besondere Struktur der Proteine unterstützt wird. Wir beabsichtigen, in enger Kooperation mit einer Pariser Arbeitsgruppe Details des Mechanismus der 1D-Diffusion von verschiedenen Restriktionsenzymen und anderen spezifisch mit DNA interagierenden Enzymen mit Hilfe von Einzelmolekülmessungen zur direkten Visualisierung des Suchprozesses zu untersuchen und die Ergebnisse mit der biologischen Funktion dieser Enzyme zu korrelieren.

蛋白质，这种特殊的DNA测序方法，在非特异性的测序方法中，最重要的是它的机制，这种机制也是非常复杂的，它有助于生物学的进一步研究。为了使这一过程更加有效，我们将通过一维成分的作用实现三维扩散，而蛋白质则在含有DNA的连接体中进行拉伸。通过传统的动力学分析方法，对超临界扩散的机理进行了探讨，发现只有一个中心点的Fragen不可能发生超临界扩散。在这一过程中，蛋白质在DNA折叠的螺旋结构上滑动，在连续滑动的过程中，蛋白质在DNA折叠的螺旋结构上滑动。在Pausen，abläuft，and schließlich，wieweit es durch die besondere Struktur der Proteine unterstützt wird.我们希望通过与一个巴黎工作组的合作，详细介绍了用DNA酶和分子探针直接观察一维扩散抑制酶和特异性酶的作用机制，并利用酶的生物学功能观察这些过程。