狂犬病ウイルス免疫不活化機構の分子基盤解析 -宿主指向性・病原性要因の解明-

狂犬病病毒免疫灭活机制的分子基础分析-宿主向性和致病因素的阐明-

• 批准号: 21J12357
• 负责人: 杉山 葵
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-28 至 2023-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21J12357/
• 关键词: 蛋白質科学; クライオ電子顕微鏡; X線結晶構造解析; 狂犬病ウイルス; 免疫分子

ウイルスがどの宿主に対して感染性を示すか（宿主指向性）を論じるうえで，細胞内におけるウイルス蛋白質と宿主因子の相互作用による，宿主特異的な免疫不活化 (Counteraction) 機構があるか否かが重要である。本研究では，致死率（ほぼ）100％を引き起こす狂犬病ウイルスのP蛋白質が，宿主免疫の中心を担うSTATを阻害する機構に着目している。細胞や個体を使った実験から，P蛋白質とSTATの何らかの相互作用が病原性発現要因であることが報告されている。私はこれまでの研究で，P蛋白質とSTATの標品調製・評価系を確立し，分子レベルで両者の結合部位を絞り込んできた。当該年度においては，狂犬病ウイルスが獲得したCounteraction機構の解明を見据えた，狂犬病ウイルスP蛋白質-STAT複合体の高分解能構造取得に向け，クライオ電子顕微鏡及び結晶構造解析を進めている。高分解能の構造情報を取得するためには，測定サンプルである狂犬病ウイルスP蛋白質-STAT複合体の質を向上させることが課題だった。そこで，複合体サンプル調製法の見直しを行った。培養・破砕方法，並びに複合体作製条件等を再検討した結果，従来よりも凝集の少ない，高濃度で安定な複合体サンプルの調製に成功した。調製した複合体を用いて，昨年度の検討により絞り込んだ電顕測定に最適なサンプル条件において，北大や京大の電子顕微鏡を用いてデータセットを取得後，解析を行った。解析を進めるにつれ，電顕測定時の（氷薄膜に包埋された）サンプル粒子は複数の状態が混在しており，高分解能の情報取得を妨げる原因となっていたことが分かった。そこで，複数の粒子状態を区別する工夫を，サンプル調製及び解析方法において検討してきた。現在目的複合体構造が部分的に捉えられており，発表の準備を進めている段階である。

The host immune inactivation (Counteraction) mechanism is important because of the importance of the host immune inactivation (Counteraction) mechanism. In this study, the fatality rate (mortality) was 100%, and the host immunization center was responsible for the prevention of STAT. The pathogenicity of the interaction between STAT and P protein is now reported due to the pathogenicity of the virus. In the private study, the label of P protein STAT was confirmed, and the combination of the molecular marker and the molecular marker was confirmed. In the year of the year, the rabies virus was confirmed by the Counteraction Agency that the rabies virus P protein-STAT complex could be highly decomposed to obtain orientation, computer microscopes and analysis of the results. High decomposition can be used to detect rabies, rabies, P protein, STAT complex, rabies and rabies. This is the first step of the method, and the method is very simple. Culture the broken method, and compare the results of the conditions and so on. The results show that the agglutination is less and the diazepam is more stable. In the year of last year, the conditions for the determination of the most expensive electronic equipment in Beijing University and Beijing University were analyzed after the use of the microwave microphone. In the process of analysis and electronic measurement, the complex number of particles is mixed in the temperature field, and the high decomposition can cause the difference between the temperature and the temperature. The number of particles is different, the number of particles, and the analytical method. Now the purpose is to copy the information in the part of the system, and the table is ready to make progress.

项目成果

狂犬病ウイルス P 蛋白質による宿主の免疫経路阻害機構の解明

阐明狂犬病病毒P蛋白抑制宿主免疫途径的机制

• 发表时间: 2021
• 作者: 山口拓人;吉見拓展;太田泰友;岩本敏;〇南未来，杉山葵，野間井智，蒋欣欣，前仲勝実，姚閔，尾瀬農之
• 通讯作者: 〇南未来，杉山葵，野間井智，蒋欣欣，前仲勝実，姚閔，尾瀬農之

病原性理解のための Lyssavirus P 蛋白質 C 末端ドメイン構造解析

狂犬病病毒 P 蛋白 C 端结构域结构分析用于了解致病性

• 发表时间: 2021
• 作者: 〇杉山葵，野間井智，蒋欣欣，南未来，前仲勝実，伊藤直人，Paul R. Gooley;Gregory W. Moseley，姚閔，尾瀬農之
• 通讯作者: Gregory W. Moseley，姚閔，尾瀬農之

Studying the mechanism of rabies virus P-protein inhibition JAK-STAT pathway of host

狂犬病病毒P蛋白抑制宿主JAK-STAT通路的机制研究

• 发表时间: 2022
• 作者: Aoi Sugiyama;Miku Minami;Yukihiko Sugita;Mika Hirose;Shunsuke Kita;Katsumi Maenaka;Min Yao;Toyoyuki Ose
• 通讯作者: Toyoyuki Ose

狂犬病ウイルスP蛋白質によるSTAT阻害機構解明のための，複合体クライオ電顕構造解析に向けた取り組み

通过复杂的冷冻电镜结构分析来阐明狂犬病病毒 P 蛋白的 STAT 抑制机制

• 发表时间: 2022
• 作者: Kumpei Tsuji;Mitsuteru Asai;Kiyonobu Kasama;〇杉山葵，南未来，杉田征彦，廣瀬未果，喜多俊介，有森貴夫，高木淳一，前仲勝実，姚 閔，尾瀬農之
• 通讯作者: 〇杉山葵，南未来，杉田征彦，廣瀬未果，喜多俊介，有森貴夫，高木淳一，前仲勝実，姚 閔，尾瀬農之

狂犬病ウイルスP蛋白質によるJAK-STATシグナル阻害機構の解明

狂犬病病毒P蛋白抑制JAK-STAT信号机制的阐明

• 发表时间: 2021
• 作者: 〇杉山葵，南未来，野間井智，蒋欣欣，Paul R. Gooley;Gregory W.Moseley，前仲勝実，姚閔，尾瀬農之
• 通讯作者: Gregory W.Moseley，前仲勝実，姚閔，尾瀬農之