狂犬病ウイルス免疫不活化機構の分子基盤解析 -宿主指向性・病原性要因の解明-

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ウイルスがどの宿主に対して感染性を示すか（宿主指向性）を論じるうえで，細胞内におけるウイルス蛋白質と宿主因子の相互作用による，宿主特異的な免疫不活化 (Counteraction) 機構があるか否かが重要である。本研究では，致死率（ほぼ）100％を引き起こす狂犬病ウイルスのP蛋白質が，宿主免疫の中心を担うSTATを阻害する機構に着目している。細胞や個体を使った実験から，P蛋白質とSTATの何らかの相互作用が病原性発現要因であることが報告されている。私はこれまでの研究で，P蛋白質とSTATの標品調製・評価系を確立し，分子レベルで両者の結合部位を絞り込んできた。当該年度においては，狂犬病ウイルスが獲得したCounteraction機構の解明を見据えた，狂犬病ウイルスP蛋白質-STAT複合体の高分解能構造取得に向け，クライオ電子顕微鏡及び結晶構造解析を進めている。高分解能の構造情報を取得するためには，測定サンプルである狂犬病ウイルスP蛋白質-STAT複合体の質を向上させることが課題だった。そこで，複合体サンプル調製法の見直しを行った。培養・破砕方法，並びに複合体作製条件等を再検討した結果，従来よりも凝集の少ない，高濃度で安定な複合体サンプルの調製に成功した。調製した複合体を用いて，昨年度の検討により絞り込んだ電顕測定に最適なサンプル条件において，北大や京大の電子顕微鏡を用いてデータセットを取得後，解析を行った。解析を進めるにつれ，電顕測定時の（氷薄膜に包埋された）サンプル粒子は複数の状態が混在しており，高分解能の情報取得を妨げる原因となっていたことが分かった。そこで，複数の粒子状態を区別する工夫を，サンプル調製及び解析方法において検討してきた。現在目的複合体構造が部分的に捉えられており，発表の準備を進めている段階である。