血液肝臓間相互作用を加味したミトコンドリア毒性評価系の構築と肝障害機序の解明

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前年度は、骨髄細胞特異的にシクロフィリンD (MPT制御因子の1つ)欠損させたマウスを作製し、アセトアミノフェン投与による肝障害に関与することを示唆するデータを得ることができた。前年度の結果を基に本年度では、アセトアミノフェン肝障害発症過程に焦点を当てその機序を検証することを目的とした。まず初めに血小板でMPTが誘導されることを検証するため単離血小板を用いて血小板の活性化をフローサイトメトリーを用いて評価した。その結果、アセトアミノフェンの代謝物であるN-アセチル-p-ベンゾキノンイミン(NAPQI)を曝露によってMPT依存的な血小板の活性化を確認することができた。これはNAPQIがアセトアミノフェン肝障害の原因となる活性代謝物であることと矛盾しない結果である。次に血小板が肝臓で蓄積しているかを検証するため、骨髄移植マウスにアセトアミノフェンを投与し、1, 2, 6時間後に肝臓を単離し、浸潤した非実質細胞の割合を評価した。その結果、投与後1時間より有意に血小板数の増加が見られた。この増加は骨髄のシクロフィリンD欠損マウスでは観察されず、血小板のMPT誘導に起きている蓄積が示唆された。最後に肝実質細胞のMPT誘導に及ぼす影響を評価するためアセトアミノフェン投与後1, 2時間後の肝臓からミトコンドリアを単離しミトコンドリアの呼吸機能、膜電位並びにMPTへの影響を評価した。その結果、アセトアミノフェン投与群において呼吸機能・膜電位の低下そしてMPT誘導能の増加が確認できた。この影響は骨髄シクロフィリンD欠損マウスでは確認されなかった。以上より、アセトアミノフェン肝障害では発症過程に血小板のMPT誘導が血小板の肝臓への蓄積、そして肝ミトコンドリアMPT誘導能の上昇が起きることが示唆された。今後はマイクロアレイなどを用いて遺伝子変動を介した詳細な機序解明を進めていく予定である。