郷土愛を育む小・中学校の環境教育に利用可能な環境DNA検出技術の確立

小・中学校の環境教育で利用可能な、環境DNA分析手法を用いた希少野生生物の簡便かつ迅速な検出技術の確立を目指している。これまでの連携研究実績や地元小・中学校の教員との繋がりを考え、福井県越前市を対象地域とした。本市に生息する絶滅危惧種であるナガレホトケドジョウ、トミヨ、アベサンショウウオを対象とし、環境DNAの迅速検出技術の確立を試みている。①昨年度作成したトミヨ属特異的プライマープローブセットによるトミヨの特異的増幅が確認された。②このプライマープローブセットと昨年度作成したアベサンショウウオ特異的プライマープローブセットをを用いて、環境水か両種両種の環境DNAの検出を試みた。簡易抽出キットと酵素は昨年度個体から抽出したDNAを用いて最適だと導き出した組み合わせで行った。その結果、簡易抽出では、モバイル型、ベンチトップ型のいずれの装置でも検出されず、高純度精製によるもののみ検出された。簡易抽出は阻害物質の影響で検出されなかった可能性があるため、阻害物質除去剤を使用したところ、モバイル型・ベンチトップ型いずれの装置でも検出されなかった。そこで、サンプルの希釈溶液によるqPCRを行ったところ、池のサンプルのみモバイル型・ベンチトップ型いずれの装置でも検出された。③産卵時期を迎えたアベサンショウウオの環境水を採水しフィルターろ過、現場ろ過した環境水サンプルをモバイル型・ベンチトップ型qPCRで環境DNA検出を行った結果、実験室でフィルターろ過したもののみで検出された。但し、簡易な検出手法の確立からは遠ざかってしまう結果なので、今後は更なる簡易抽出法を試してみる必要がある。

小・中学校の環境教育で利用可能な、環境DNA分析手法を用いた希少野生生物の簡便かつ迅速な検出技術の確立を目指している。これまでの連携研究実績や地元小・中学校の教員との繋がりを考え、福井県越前市を対象地域とした。本市に生息する絶滅危惧種であるナガレホトケドジョウ、トミヨ、アベサンショウウオを対象とし、環境DNAの迅速検出技術の確立を試みている。①昨年度作成したトミヨ属特異的プライマープローブセットによるトミヨの特異的増幅が確認された。②このプライマープローブセットと昨年度作成したアベサンショウウオ特異的プライマープローブセットをを用いて、環境水か両種両種の環境DNAの検出を試みた。簡易抽出キットと酵素は昨年度個体から抽出したDNAを用いて最適だと導き出した組み合わせで行った。その結果、簡易抽出では、モバイル型、ベンチトップ型のいずれの装置でも検出されず、高純度精製によるもののみ検出された。簡易抽出は阻害物質の影響で検出されなかった可能性があるため、阻害物質除去剤を使用したところ、モバイル型・ベンチトップ型いずれの装置でも検出されなかった。そこで、サンプルの希釈溶液によるqPCRを行ったところ、池のサンプルのみモバイル型・ベンチトップ型いずれの装置でも検出された。③産卵時期を迎えたアベサンショウウオの環境水を採水しフィルターろ過、現場ろ過した環境水サンプルをモバイル型・ベンチトップ型qPCRで環境DNA検出を行った結果、実験室でフィルターろ過したもののみで検出された。但し、簡易な検出手法の確立からは遠ざかってしまう結果なので、今後は更なる簡易抽出法を試してみる必要がある。