コリネ型細菌のビオチン排出輸送体の同定と発酵への応用

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【BioE欠損候補株の選抜法】想定される未同定のビオチン排出輸送体（BioEと命名）の欠損候補株を選抜するための構想は以下の通り。コリネ型ビオチン生産菌はビオチン取り込み輸送体BioYを破壊すると、ビオチンを自ら合成できるのにビオチン要求性となる。このBioY破壊株（DD1株と命名）から再びビオチン非要求性になったサプレッサー株を選抜する。BioE欠損株に想定される表現型は次の3点。① 生育にビオチンを要求しない　② ビオチンを分泌しないか分泌量が低下している　③ 細胞内に高濃度のビオチンが蓄積している。【BioE欠損候補株の取得】DD1株から変異処理にて上記3要件を満たす候補株を1株（#499株）見出した。全ゲノム解析で#499株に計80個の変異を見出す。その内、以下の4変異を有力候補として選抜。① Cgl0406：[Pro822Ser] ABC transporter, permease component　② Cgl0859：[Ala307Val] Hypothetical membrane protein　③ Cgl0946：[Gly88Asp] ABC transporter, ATPase component　④ Cgl2657：[Gly70Asp] Transcriptional regulator, Cgl2656 (LysE-type translocator)のActivator【相補試験】上記4種の野生型遺伝子をクローン化。各プラスミドを#499株に導入し相補試験を実施。もし目的遺伝子であれば、親株#499株の表現型（ビオチン要求性）に戻るはずであるが、いずれも回復能を示さなかった。従って、いずれも目的遺伝子ではないと判断された。原因変異を抽出する段階で目的変異を見逃している可能性があるため、今後は自然変異によって目的候補株の取得を試みる。