プロテインホスファターゼPP2Cεが制御する小胞体ダイナミクスの機構解明

小胞体の構造は、主にタンパク質合成に関与する粗面小胞体と呼ばれるリボソームが付着したシート構造と、リボソームが付着していない滑面小胞体と呼ばれるチューブル構造からなる。この構造は、様々な細胞内外の環境に応じて劇的に変化するが、小胞体のチューブル構造の形成と伸長を制御する機構は不明な点が多い。小胞体に局在するProtein Phosphatase, Mg2+/ Mn2+ Dependent 1L (Ppm1L) は、小胞体上でpunctaを形成し、そのpunctaよりチューブ構造がよく形成される事を見出した事から、本研究では、Ppm1Lによる小胞体ダイナミクスの制御機構を解明する事を目的としている。Protein PhosphataseであるPpm1Lのターゲット分子は、リン酸化プロテオミクスを用いた解析により同定し、幾つかの小胞体タンパク質である分子に着目したが、そのどれもが、その分子のリン酸化状態に依存して小胞体の形態を変化させなかった。そこで、Ppm1Lに対するダイレクトなターゲット分子を同定する為、リコンビナントPpm1LとPpm1L KO株の粗抽出液を用いたin vitro酵素反応実験とリン酸化プロテオミクスを行った結果、WASH complex subunitの1つを候補として同定した。現在までに、この分子が、直接的にPpm1Lによって脱酸化される事をin vitro酵素反応で確認している。

小胞体の構造は、主にタンパク質合成に関与する粗面小胞体と呼ばれるリボソームが付着したシート構造と、リボソームが付着していない滑面小胞体と呼ばれるチューブル構造からなる。この構造は、様々な細胞内外の環境に応じて劇的に変化するが、小胞体のチューブル構造の形成と伸長を制御する機構は不明な点が多い。小胞体に局在するProtein Phosphatase, Mg2+/ Mn2+ Dependent 1L (Ppm1L) は、小胞体上でpunctaを形成し、そのpunctaよりチューブ構造がよく形成される事を見出した事から、本研究では、Ppm1Lによる小胞体ダイナミクスの制御機構を解明する事を目的としている。Protein PhosphataseであるPpm1Lのターゲット分子は、リン酸化プロテオミクスを用いた解析により同定し、幾つかの小胞体タンパク質である分子に着目したが、そのどれもが、その分子のリン酸化状態に依存して小胞体の形態を変化させなかった。そこで、Ppm1Lに対するダイレクトなターゲット分子を同定する為、リコンビナントPpm1LとPpm1L KO株の粗抽出液を用いたin vitro酵素反応実験とリン酸化プロテオミクスを行った結果、WASH complex subunitの1つを候補として同定した。現在までに、この分子が、直接的にPpm1Lによって脱酸化される事をin vitro酵素反応で確認している。