Development of new technology to improve conception rate after artificial insemination using frozen dog semen

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一般的に精液希釈液には20％の卵黄が含まれている。卵黄は精子を保護し凍結処理によるダメージを軽減する役割を持っているが、精子の代謝を阻害する作用も持っている。そこで、当研究室で使用している精液希釈液（EYT-FC）の最適な卵黄濃度を明らかにするための実験を行った。最初に、異なる卵黄濃度（5、10、20％）を含むEYT-FCを新たに作成し、犬凍結精液を作成して融解後の精液性状を比較した。その結果、融解後の精子活力、精子生存率および正常精子アクロソーム保有率は有意差がみられなかったが、20％卵黄群が他群に比較して最も高値を示した。また精子奇形率は20％卵黄群が他群に比較して有意に低値を示した。本研究室の凍結精液には界面活性剤であるOrvus ES paste（OEP）を使用している。OEPは卵黄成分と結合することで精子アクロソームを保護し、凍結融解後のダメージを軽減することができるが、同時に殺精子効果を持っているため高濃度で使用すると精液性状に影響を及ぼす可能性が考えられる。そのため、卵黄濃度が低いものではOEP濃度が高濃度になってしまったことから、20％卵黄群よりも低値を示したものと考えられた。 そのため、次に各精液希釈液の最終OEP濃度を卵黄濃度に合わせて調整して凍結精液を作成し、融解後の性状を比較した。その結果、精子活力と精子生存率についてはやはり20％卵黄群が最も高値を示した。精子奇形率も20％卵黄群が他群に比較して有意に低値を示した。また、OEP量が少なかった5％および10％卵黄群に関しては、融解後6時間の正常精子アクロソーム保有率が有意に低値を示し、OEP量が少なくなったことで、精子保護作用が低下したことが明らかとなった。これらの結果から、本研究室で使用しているEYT-FCの最適卵黄濃度は20％が最も良いことが改めて確認された。