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飢餓状態でのhnRNP A1消失とそれに続くncRNA遊離による癌細胞形質の変動

饥饿条件下由于 hnRNP A1 丢失和随后的 ncRNA 释放而导致癌细胞性状发生变化

基本信息

批准号：
21K06538
负责人：
高橋徹行
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Musashino University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K06538/
关键词：
hnRNP A1 CCND1 mRNA boxB/lambdaNシステム miRNA lncRNA circRNA ｈｎRNP A1 がん細胞栄養飢餓状態

项目摘要

新規hnRNP A1結合性mRNAのCCND1 mRNAについて更に詳細な解析を実施した。欠失変異体を用いた解析により、前年度にに明らかにした飢餓状態によるhnRNP A1タンパク消失を介したCCND1 mRNA不安定化はhnRNP A1タンパク内のRRM1ドメインにより規定される事が明らかになった。この結果を裏付けるように、RRM1ドメイン欠失変異体を安定発現させたHeLa細胞（HeLa-deltaRRM1）をヌードマウス皮下に移植しても、全く腫瘍形成が認められなかった。また、in vitroによる検討において、HeLa-deltaRRM1は著明な増殖速度低下とオートファジー亢進をもたらし、これはCCND1発現のレスキューによって回復した。低栄養状態によりhnRNP A1 mRNA 3'UTRへの結合性が変動するmiRNAの更なる同定を試みた。結合予測位置解析とレポーターアッセイにより絞り込んだ8種のmiRNAについて、qPCRとimmunoblottingによる発現解析を実施した。lambdaN/boxBシステムを用いたプルダウンによる沈降物からのRNAを用いたqPCR解析では、4種のmiRNA (miR-4734、miR-4745-5p、miR-6126、miR-6798-5p)でこれまでの結果と矛盾することなく低栄養状態による結合量上昇が認められたが、総RNAを用いたqPCR解析では低栄養状態によるレベル変動は認められなかった。また、miR-4745-5p、miR-6798-5pの過剰発現はhnRNP A1タンパクレベルの減少を引き起こしたが、mRNAレベルへの影響は見られなかった。これより、低栄養状態によるhnRNP A1タンパクレベル低下にはmiR-4745-5p、miR-6798-5pを介する翻訳阻害が関与する事が明らかになった。

The new rule hnRNP A1 combines mRNA CCND1 mRNA applications to improve performance analysis and application. In the previous year, it was announced that the status of hnRNP A1 was significantly higher than that of the previous year. In the previous year, it was announced that CCND1 mRNA would not be stable in the RRM1 system of hnRNP A1. It is stipulated that the situation should be clear. The results showed that the HeLa cell (HeLa-deltaRRM1) was significantly higher than that of the control group (HeLa-deltaRRM1). The subcutaneous transplantation was successful, and the whole body was successfully transplanted. In vitro, in vitro, and HeLa-deltaRRM1 indicated that the colonization rate was low, the colonization rate was low, the proliferation rate was increased, and the CCND1 was detected. The hnRNP A1 mRNA 3 'UTRY combination activity activity miRNA changes the same as the test. Combined with the location analysis method, the location analysis method, the location analysis The results show that there is a contradiction between lambdaN/boxB and miRNA (miR-4734, miR-4745-5p, miR-6126, miR-6798-5p). The results show that the results are contradictory in terms of the combination of miRNA (miR-4734, miR-4745-5p, miR-6126, miR-6798-5p) and so on. Please use the RNA qPCR to analyze the low status of the computer. You will not be able to do this. For example, miR-4745-5p, miR-6798-5p, hnRNP A1, mRNA-5p, mRNA-5p, QR-5p, POS-5p, POS-5p, POS-5p. HnRNP A1, miR-6798-5p, miR-4745-5p, miR-6798-5p, and so on.