飢餓状態でのhnRNP A1消失とそれに続くncRNA遊離による癌細胞形質の変動

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新規hnRNP A1結合性mRNAのCCND1 mRNAについて更に詳細な解析を実施した。欠失変異体を用いた解析により、前年度にに明らかにした飢餓状態によるhnRNP A1タンパク消失を介したCCND1 mRNA不安定化はhnRNP A1タンパク内のRRM1ドメインにより規定される事が明らかになった。この結果を裏付けるように、RRM1ドメイン欠失変異体を安定発現させたHeLa細胞（HeLa-deltaRRM1）をヌードマウス皮下に移植しても、全く腫瘍形成が認められなかった。また、in vitroによる検討において、HeLa-deltaRRM1は著明な増殖速度低下とオートファジー亢進をもたらし、これはCCND1発現のレスキューによって回復した。低栄養状態によりhnRNP A1 mRNA 3'UTRへの結合性が変動するmiRNAの更なる同定を試みた。結合予測位置解析とレポーターアッセイにより絞り込んだ8種のmiRNAについて、qPCRとimmunoblottingによる発現解析を実施した。lambdaN/boxBシステムを用いたプルダウンによる沈降物からのRNAを用いたqPCR解析では、4種のmiRNA (miR-4734、miR-4745-5p、miR-6126、miR-6798-5p)でこれまでの結果と矛盾することなく低栄養状態による結合量上昇が認められたが、総RNAを用いたqPCR解析では低栄養状態によるレベル変動は認められなかった。また、miR-4745-5p、miR-6798-5pの過剰発現はhnRNP A1タンパクレベルの減少を引き起こしたが、mRNAレベルへの影響は見られなかった。これより、低栄養状態によるhnRNP A1タンパクレベル低下にはmiR-4745-5p、miR-6798-5pを介する翻訳阻害が関与する事が明らかになった。