ヒト肉腫自然発症モデルを利用した血中悪性化指標マーカーの探索

使用自发性人类肉瘤模型寻找血液恶性肿瘤指示标记

基本信息

批准号：
21K07192
负责人：
山田大祐
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

マウス腫瘍モデルにおいて、Prrx1陽性な肢芽間葉系細胞系譜の細胞が肉腫の起源となることが報告されている。肉腫を含めた複数のがん種において、がん抑制遺伝子TP53の変異が確認されていることから、昨年度はTP53が欠損したヒト多能性幹細胞の樹立を行った。本年度は、TP53を欠損させた拡大培養が可能なヒト多能性幹細胞由来肢芽間葉系細胞、Expandable limb bud-like mesenchymal cell(ExpLBM)にドキシサイクリン誘導的にIDH1R132C変異体あるいはEWS-FLI1の発現させる系、もしくはRB1のノックダウンを可能にする系を導入し、NOD-SCIDマウスの腎被膜下への移植を行った後にドキシサイクリンを投与することで腫瘍形成の有無を確認することにした。ドキシサイクリン投与5ヶ月後にマウスを屠殺し腎臓を摘出した結果、IDH1R132CあるいはEWS-FLI1の発現では腫瘍の形成は認められなかったが、RB1ノックダウン群では腫瘍の形成が認められた。また、腎組織への腫瘍細胞の浸潤も確認された。ヒト多能性幹細胞に関してはTP53が欠損した414C2(ヒトiPS細胞株)とSEES4(ヒトES細胞株)を用いたが、両株ともにRB1ノックダウンによって腫瘍が形成されることが確認出来た。形成された腫瘍の組織切片を用いて、PRRX1の免疫染色を行ったところ、腫瘍はPRRX1陽性であることが見出された。また、ヒト骨肉腫の臨床検体由来の組織切片において、PRRX1の免疫染色を行った結果、腫瘍領域においてPRRX1陽性細胞が確認された。以上のことから、ExpLBMを用いた肉腫モデルの構築は順調に進んでいると考えられる。

据报道，来自PRRX1阳性肢体间充质细胞谱系的细胞是小鼠肿瘤模型中肉瘤的起源。癌症抑制基因TP53的突变已在包括肉瘤在内的多种癌症类型中得到证实，因此，去年我们建立了缺乏TP53的人类多能干细胞。今年，我们决定引入一个系统，该系统允许强力霉素诱导的IDH1R132C突变体或EWS-FLI1或EWS-FLI1到人类多能干细胞衍生的肢体芽芽样细胞（Invybm），可以将其扩展到TP53缺乏的人类Pluripotent for for tp53强力霉素以表达强力霉素，然后在植入肾囊下的NOD-SCID小鼠后施用强力霉素，以确认存在或不存在肿瘤形成。给药后五个月，牺牲了小鼠并去除肾脏。尽管在表达IDH1R132C或EWS-FLI1时未观察到肿瘤的形成，但在RB1敲低组中观察到肿瘤的形成。还证实了肿瘤细胞进入肾脏组织。对于人类多能干细胞，使用了414C2（人IPS细胞系）和SEES4（人ES细胞系），它们缺乏TP53，但已确认两种菌株中RB1敲低形成了肿瘤。发现使用形成的肿瘤的组织切片对PRRX1进行免疫染色为PRRX1阳性。此外，对PRRX1的免疫染色是在源自人骨肉瘤的临床标本的组织切片上进行的，并在肿瘤区域证实了PRRX1阳性细胞。基于上述内容，据信使用ExplBM的肉瘤模型的构建顺利进行。