組織常在性マクロファージによるがん免疫始動システムの解析

多数の変異が蓄積した悪性腫瘍における免疫抑制機構については多くの知見が集積している一方、発がんの初期段階でがん免疫がどのように始動するのか、そのタイミングやメカニズム、さらにがん免疫の始動に関わる免疫細胞等はほとんどわかっていない。研究代表者は、がん免疫を始動する細胞として組織常在性マクロファージに着目し、その役割を解析するため、乳腺オルガノイドを用いた新しいモデルシステムを構築した。その結果、組織常在性マクロファージが発がんの初期段階に生じるような特定の変異細胞を感知・貪食することを明らかにした。このモデルシステムでは、CX3CR1-GFPマウス由来の乳腺オルガノイドに、レンチウイルスベクターによってtdTomato-P2A-oncogene配列を導入する。それにより、組織常在性マクロファージをGFP＋、変異細胞をtdTomato＋として可視化することができ、そのinteractionを経時的に解析することを可能にした。これまでHRasV12, Twist, p53DD（ドミナントネガティブ変異体）についてウイルスベクターを作製し、解析を進めた結果、HRasV12変異細胞に対しては組織常在性マクロファージが感知し、貪食することが明らかになった。一方、Twist, p53DDなどの変異細胞については、顕著な反応はみられなかった。当該年度は、HRasV12変異細胞に対する組織常在性マクロファージの特異的な反応について、その分子機構を明らかにするためにまずはEat meシグナルであるホスファチジルセリンの細胞外への露出を検討するため、実験系を確立した。また、マクロファージによる標的細胞の貪食機構を詳しく解析するため、リン脂質２重層でコートされたシリカビーズを用いたアッセイ系も推進している。

多数の変異が蓄積した悪性腫瘍における免疫抑制機構については多くの知見が集積している一方、発がんの初期段階でがん免疫がどのように始動するのか、そのタイミングやメカニズム、さらにがん免疫の始動に関わる免疫細胞等はほとんどわかっていない。研究代表者は、がん免疫を始動する細胞として組織常在性マクロファージに着目し、その役割を解析するため、乳腺オルガノイドを用いた新しいモデルシステムを構築した。その結果、組織常在性マクロファージが発がんの初期段階に生じるような特定の変異細胞を感知・貪食することを明らかにした。このモデルシステムでは、CX3CR1-GFPマウス由来の乳腺オルガノイドに、レンチウイルスベクターによってtdTomato-P2A-oncogene配列を導入する。それにより、組織常在性マクロファージをGFP＋、変異細胞をtdTomato＋として可視化することができ、そのinteractionを経時的に解析することを可能にした。これまでHRasV12, Twist, p53DD（ドミナントネガティブ変異体）についてウイルスベクターを作製し、解析を進めた結果、HRasV12変異細胞に対しては組織常在性マクロファージが感知し、貪食することが明らかになった。一方、Twist, p53DDなどの変異細胞については、顕著な反応はみられなかった。当該年度は、HRasV12変異細胞に対する組織常在性マクロファージの特異的な反応について、その分子機構を明らかにするためにまずはEat meシグナルであるホスファチジルセリンの細胞外への露出を検討するため、実験系を確立した。また、マクロファージによる標的細胞の貪食機構を詳しく解析するため、リン脂質２重層でコートされたシリカビーズを用いたアッセイ系も推進している。