Impact of cysteine modifications of apolipoprotein E on the remnant lipoprotein metabolism

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本年度当初は前年度に引き続き、種々の酸化還元修飾を加えたapoEをコーティングしたプレートにおけるLRP-1高発現ヒト線維芽細胞（GM00701)の接着性により、LRP1とapoEの相互作用に及ぼすapoE-Cys-thiol基のレドックス変化の影響を検討してきたが、本実験系では再現性のあるデータが得られず有意差の有無を的確に評価できなかった。そこで、本年度はapoE含有蛍光標識TG-richエマルジョン粒子(apoE-F-EP)を作製し、これをGM00701の培養液に添加して、apoE-F-EPの細胞との結合性、培養液からのクリアランス能、および異化能について蛍光強度を指標として、1) apoEアイソフォームの影響と、2) apoE-Cys-thiol基のレドックス変化の影響について検討を行ってきた。1）については、① apoE3-F-EPは主要な3種類のアイソフォームの中で最も効果的にLRP1に結合して異化されるのに対し、② apoE4-F-EPはapoE3-F-EPとほぼ同等のLRP1との結合性を有していながらも細胞内に取り込まれて異化される能力が最も低いこと、また、③ apoE2-F-EPの親和性はapoE3-F-EPおよびapoE4-F-EPの約70％と最も低いが、LDL受容体に対する親和性と比べると十分認められ、むしろapoE4-F-EPより十分な異化能が認められることを明らかにした。2）については、① TCEP還元はapoE3-F-EPとLRP1との結合性を増強する一方で異化能を抑制するが、apoE2-F-EPには影響しないこと、② apoAIIとのジスルフィド結合はapoE2-F-EPとLRP1との結合性を抑制する一方で異化能を促進することを明らかにした。