キレーター含有糖ユニットで修飾した抗体の標識反応と評価

含螯合剂糖单元修饰的抗体的标记反应和评价

• 批准号: 21K07714
• 负责人: 破入 正行
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: National Institutes for Quantum Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K07714/
• 关键词: 放射性金属核種; 位置特異的標識; 抗体; 糖鎖; 銅-64; 位置特異的修飾; 糖鎖修飾抗体; 位置特異的修飾方法; PET; 放射性治療核種

放射性核種と抗体との錯形成を行うには、放射性金属捕捉部位であるキレーターをLysやCysの側鎖へ導入する方法が一般的である。しかし、抗体のどの位置にキレーターが導入されたかを確認するには非常に困難であり、またキレーターをもつ抗体の品質にバラツキが生じることも予想できる。そこで位置特異的にキレーターを導入する部位としてAsn側鎖に付加している糖鎖に注目した。今年度は昨年度に続きランダムにキレーターを導入した抗体と糖鎖部分を糖加水分解酵素によって除去した抗体へランダムにキレーターを導入した抗体を標識した化合物のイメージング、アジド基を有する糖鎖の合成及び抗体への導入反応を検討した。キレーターはDFOを用い、放射性核種としてZr-89を使用した。抗体はパニツムマブ、がん細胞としてヒト大腸がん由来DLD-1またはHT-29を藩種したマウスを用いたPETイメージングを行なった。パニツムマブのZr-89標識反応は糖鎖があるなしにかかわらず同様な放射化学的収率および放射化学的純度で標識抗体が得られた。またPET撮像においてもほぼ変わらない動態であった。抗体に導入するオキサゾリン糖鎖の合成は７工程で調製し、糖加水分解酵素であるENGaseを用いて部分的糖鎖加水分解パニツムマブへ導入した。SDS-PAGEを用いて導入効率を確認後、イオンクロマトグラフィーで精製を行い、中程度の収率で得た。次いでクリック反応を用いてパニツムマブ中のアジド基にDOTA誘導体を導入した。精製後、キレーター導入パニツムマブをトリプシン処理した後LC-MSMSで確認したところ不純物が混入していることがわかった。

Radioactive nuclide と antibody と の fault line form を う に は and radioactive metals capture で あ る キ レ ー タ ー を Lys や Cys の side chain へ import す る method が general で あ る. し か し, antibody の ど の position に キ レ ー タ ー が import さ れ た か を confirm す る に は very difficult に で あ り, ま た キ レ ー タ ー を も つ antibody の quality に バ ラ ツ キ が raw じ る こ と も to think で き る. そ こ で location specific に キ レ ー タ ー を import す る parts と し て Asn side chain に plus し て い る sugar に lock out し た. Our annual に は yesterday 続 き ラ ン ダ ム に キ レ ー タ ー を import し た antibody と lock parts を sugar sugar hydrolysis enzyme に よ っ て remove し た antibody へ ラ ン ダ ム に キ レ ー タ ー を import し た antibody を logo し た compound の イ メ ー ジ ン グ, ア ジ ド を has an す る lock の sugar synthesis and び antibody へ の import anti 応 を beg し 検 た. Youdaoplaceholder0 キレ タ タ タ を DFOを is used with た, radioactive nuclear species と <s:1> てZr-89を is used with た た. Antibody は パ ニ ツ ム マ ブ, が ん cells と し て ヒ ト e. が ん origin DLD clutches - 1 ま た は HT - 29 を Francisco kind し た マ ウ ス を with い た PET イ メ ー ジ ン グ を line な っ た. パ ニ ツ ム マ ブ の Zr - 89 mark against 応 は sugar lock が あ る な し に か か わ ら ず with others な radiochemical 収 rate お よ び で radiochemical purity identification antibody が must ら れ た. Youdaoplaceholder0 PET image にお て て ほぼ ほぼ variable わらな であった dynamic であった. Antibody に import す る オ キ サ ゾ リ ン sugar lock の synthetic は 7 engineering で modulation し, sugar hydrolysis enzyme で あ る ENGase を with い て part of sugar lock hydrolytic decomposition パ ニ ツ ム マ ブ へ import し た. Sds-page を with い て import を confirmed working rate, イ オ ン ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー で refined を い, degree of の た で 収 rate. Time い で ク リ ッ ク anti 応 を with い て パ ニ ツ ム マ ブ in の ア ジ ド base に DOTA inductor を import し た. After refining, キ レ ー タ ー import パ ニ ツ ム マ ブ を ト リ プ シ ン 処 Richard し た after LC - MSMS で confirm し た と こ ろ impurity content が mixed with し て い る こ と が わ か っ た.

项目成果

糖鎖加水分解パニツムマブの標識合成と体内動態

糖基化帕尼单抗的标记合成和药代动力学

• 发表时间: 2022
• 作者: 破入 正行; 謝 琳; 張 一鼎; 森 昌子; 筒井 正斗; 水野 真盛; 張 明栄
• 通讯作者: 張 明栄

TRT薬剤211At-AITM誘導体の合成と評価

TRT药物211At-AITM衍生物的合成与评价

• 发表时间: 2022
• 作者: 破入 正行; 謝 琳; 張 一鼎; 峯岸 克行; 門間 あゆみ; Hu Kuan; 藤永 雅之; 永津 弘太郎; 石岡 典子; 張 明栄
• 通讯作者: 張 明栄

Synthesis and evaluation of At-211 labeled TRT-radiopharmaceuticals (At-AITM) for melanoma with overexpressed metabotropic glutamate receptor 1.

At-211 标记的 TRT 放射性药物 (At-AITM) 的合成和评估，用于治疗代谢型谷氨酸受体 1 过表达的黑色素瘤。

• 发表时间: 2022
• 作者: Hanyu Masayuki; Xie Lin; Yiding Zhang; Minegishi Katsuyuki; Kadoma Ayumi; Hu Kuan; Fujinaga Masayuki; Nagatsu Kotaro; Ishioka Noriko; Zhang Ming-Rong
• 通讯作者: Zhang Ming-Rong