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ビタミンB6依存性てんかんの早期診断体制構築に向けたバイオマーカーの測定と探索

建立维生素B6依赖性癫痫早期诊断体系的生物标志物测定与探索

基本信息

批准号：
21K07798
负责人：
秋山倫之
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

ビタミンB6（VB6）依存性てんかんのバイオマーカー測定系の開発に関しては、分離・定量に課題が生じていたピリドキサミンに対し、塩基性物質の保持が可能なカラムを種々入手して検討したところ、十分な保持が得られるカラムが見つかった。その中から、ピリドキサミンと4-ピリドキシン酸両者が十分保持されるカラムを選び、今後の測定系開発に用いることにした。当初予定していた蛍光検出による測定法から質量分析による測定法への変更を行うことにしたため、蛍光を発さない他の物質の同時検出が可能になり、ALDH7A1欠損症およびPNPO欠損症の診断バイオマーカーの同時検出の条件がある程度定まった。また、内部標準（安定同位体）で市販されていない化合物があったが、他の化合物の安定同位体からの合成を試み、目的の化合物を得ることができた。現在、血清検体での前処理条件を検討中であり、今後は測定系のバリデーションに取り掛かる。その後、尿・髄液検体での測定方法の検討に進む予定である。遺伝子解析については、サンガー法、リアルタイムPCR、全エクソーム解析、全ゲノム解析を用い、既報の原因遺伝子に関しては診断可能な状態になっている。今後、臨床的にビタミンB6で発作が完全抑制された患者数名に対し、解析を予定している。酵素活性測定についてはALDH7A1についての検討を進め、培養尿由来細胞で酵素活性が測定できることが判明した。現在、測定条件の最適化と感度向上を目指している。また、ADLH7A1欠損症患者の尿検体を収集し、尿由来細胞の培養を進めている。

B6 (VB6) Dependency test system development, separation, quantification, problem generation, maintenance of basic substances, possible maintenance of species, start of investigation, maintenance of ten-point maintenance. In addition to the above, it is also possible to determine the content of the sample in the sample. The determination of ALDH7A1 deficiency syndrome and PNPO deficiency syndrome is based on the determination of ALDH7A1 deficiency syndrome and PNPO deficiency syndrome and the determination of ALDH7A1 deficiency syndrome. The internal standard (stable isotope) is used for the synthesis of compounds, the stable isotope of other compounds and the target compound. Currently, the pretreatment conditions for serum samples are under discussion, and in the future, the determination system will be determined. The determination method of urine and urine samples was studied and the determination method was determined. Gene analysis, detection, PCR, complete analysis, complete analysis, reported cause gene analysis, diagnosis of possible status. In the future, clinical trials will be conducted to completely suppress the number of patients, and analysis will be conducted. Enzyme activity assay ALDH7A1 assay assay Now, determine the optimization of conditions and sensitivity upward. The collection of urine samples from patients with ADLH7A1 deficiency and the culture of urine-derived cells were carried out.