Examination of the therapeutic effect on inflammatory bowel disease using HSPB6-positive exosomes derived from amnion-derived MSCs

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羊膜由来間葉系幹細胞(MSC)は、骨髄、脂肪などに存在する体性幹細胞であり、骨、軟骨、脂肪などに分化する多 分化能を有し、再生医療における有望な細胞として注目されている。申請者らは、出産時に 廃棄される卵膜に着目し、その中の羊膜には多量のMSCが含まれていること、また、骨髄や 脂肪組織由来MSCと比較すると採取時の侵襲がないことから新規の再生医療ソースとして期待されている。これまでに我々は、複数の炎症性疾患動物モデルを用いて羊膜MSCの病態改善効果を明らかにしてきた。しかしながら、これまで羊膜MSCに由来するどのような物質がさまざまな炎症性疾患の病態を改善しているのかの詳細は明らかにされていない。今年度は、炎症細胞を用いたHSPB6過剰発現ならびにHSPB6欠損羊膜MSC由来エクソソーム処理後の炎症の評価を検討した。具体的には以下の通りに実施した。方法としては、作成されたHSPB6過剰発現エクソソームならびにHSPB6欠損エクソソームの炎症性評価を明らかにするために、マウス由来マクロファージを用いて、LPSの刺激後、エクソソームを処理し、産生される複数の炎症性サイトカインをELISAにて検証したところ、HSPB6過剰発現エクソソーム処理群では、LPS刺激後の炎症性サイトカインの発現が低下したほか、炎症性サイトカインの産生に重要な転写因子の活性化についてもHSPB6過剰発現エクソソーム処理群で低下していた。さらに、細胞内へのHSPB6の取り込み能を確認するために各エクソソームをラベル化し、エクソソームの細胞への取り込み能を顕微鏡下で観察したところ、標的細胞内に取り込まれていることが明らかとなった。これらにより、今年度予定していたHSPB6過剰発現エクソソームでは抗炎症効果の検証について予想通り十分な研究成果が得られた。