Analysis of role of YB1 in PD-L1 expression to develpe immune check point inhibitor therapy

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本研究は、PD-L1（Programmed death 1 ligand 1）の発現制御におけるYBX1（Y box binding protein 1）の機能を明らかにすることである。これまでに、肺がん細胞株においてYBX1がPD-L1 mRNAの安定性を低下させることを明らかにしている。前年度の検証により、YBXによるPD-L1 mRNA不安定化には、intron retentionとは異なる機構が作用していることが考えられた。そこで、PD-L1 mRNAの3’-UTRを介したmRNA安定性におけるYBXの寄与を検証するために、3’-UTRをクローニングしてYBX1ノックダウン下でluciferase assayを行ったが、YBX1がPD-L1 mRNAの3’-UTRを介してmRNAを不安定化することを示す結果は得られなかった。そこで本年度は、3'RACE（Rapid amplification of cDNA ends）法を用いて、肺がん細胞株について、YBX1ノックダウン下におけるPD-L1 mRNAの3'-UTRの構造変化を、コントロール細胞と比較した。その結果、アガロースゲル電気泳動において、0.6kbpのプロダクトを主体とする複数のバンドが確認された。しかし、YBX1ノックダウン細胞とコントロール細胞の間に、泳動パターンの違いは認められなかった。0.6kbpのバンドについて、シーケンスを確認したところ、各クローンでPD-L1の3’UTRと相同な配列を検出した。しかし、コントロール細胞とYBX1ノックダウン細胞の間に特徴的な塩基配列の違いは認められなかった。以上の結果から、YBX1は今回検出されたPD-L1 mRNA 3'-UTRの領域を介して、mRNAの安定化に寄与する可能性が示唆された。