The effect of lymphedema on fibroblasts and macrophages

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本年度は、カポジ肉腫ウイルスサイクリン遺伝子導入マウスを用いて皮膚線維化に関する実験を行った。まずブレオマイシンを4週間毎日皮下注射して皮膚硬化を起こす、マウス強皮症モデルを用いて研究した。昨年度の研究では、リンパ浮腫のあるカポジ肉腫ウイルスサイクリン遺伝子導入マウスでは、ブレオマイシンによる皮膚硬化が減弱している可能性が見いだされたが、実験を繰り返すことにより野生型マウスと差がないことが分かった。今年度の実験において、マウスのオスとメスでは前者のほうが皮膚でのコラーゲン量が多く、真皮も厚いことが分かったので、性差を考慮して再実験することにより差がなくなった。しかしmRNA発現を確認すると、リンパ浮腫があるとブレオマイシン刺激でCTGFやコラーゲン1a1の発現が上がるとともに、MMP13の発現も上昇していた。つまり見かけ上の線維の量は変化しなくても、線維の産生と溶解がともに亢進することが分かった。次に刺激をしていないナイーブな状態で比較したところ、病理像やコラーゲン量に差はないものの、mRNA発現レベルではTGF-βやコラーゲン1a1の発現がリンパ浮腫によって低下していることが分かった。リンパ浮腫マウス新生児の皮膚から初代培養した線維芽細胞では、コラーゲン1a1mRNAの発現が野生型マウス由来の線維芽細胞より低下しており、やはりリンパ浮腫が線維芽細胞のコラーゲン発現に影響を与えることが分かった。培養線維芽細胞を用いてRNAシーケンシング解析を行い、リンパ浮腫の影響を受ける遺伝子を網羅的に解析し、治療ターゲットとなる分子の解明に努める予定であるが、すでにRNAシーケンシング解析を始めたところである。