再発性C. difficile感染症に対する新規創薬シード化合物の探索

Clostridioides difficileは、芽胞形成性を有する嫌気性グラム陽性桿菌である。本菌は、抗菌薬関連下痢症の原因菌として、強毒株の流行から世界的に問題となっている。本研究では、C. difficile感染症で問題となる再発例の抑制につなげることができるような新たな作用を有した天然化合物の探索を目的としている。今年度は、Binary toxinを構成するCDTbの組み換えタンパクを精製し、免疫したラットの抗血清より抗CDTbポリクローナル抗体を得ることが出来た。本抗体をビオチン標識化して構築したsandwich-ELISA系を用いることで、C. difficile培養上清中のCDTbを定量可能であることを確認した。次に、Binary toxin産生C. difficileを用いて、抗菌活性と芽胞形成阻害活性、毒素産生阻害活性を評価可能なスクリーニング系を構築した。毒素産生量については、これまでに構築したCDTaとCDTb、Toxin BのELISA系を用いて変動を定量的に評価した。本スクリーニング系を用いて、天然化合物ライブラリーより活性化合物の1次スクリーニングを行った結果、抗菌活性を有する化合物、芽胞形成阻害活性を有する化合物、毒素産生阻害活性を有する化合物を、それぞれ142、35、7化合物見出すことが出来た。さらに高活性の化合物の絞り込みを進めるとともに、詳細な阻害活性について解析を進めている。

Clostridioides difficileは、芽胞形成性を有する嫌気性グラム陽性桿菌である。本菌は、抗菌薬関連下痢症の原因菌として、強毒株の流行から世界的に問題となっている。本研究では、C. difficile感染症で問題となる再発例の抑制につなげることができるような新たな作用を有した天然化合物の探索を目的としている。今年度は、Binary toxinを構成するCDTbの組み換えタンパクを精製し、免疫したラットの抗血清より抗CDTbポリクローナル抗体を得ることが出来た。本抗体をビオチン標識化して構築したsandwich-ELISA系を用いることで、C. difficile培養上清中のCDTbを定量可能であることを確認した。次に、Binary toxin産生C. difficileを用いて、抗菌活性と芽胞形成阻害活性、毒素産生阻害活性を評価可能なスクリーニング系を構築した。毒素産生量については、これまでに構築したCDTaとCDTb、Toxin BのELISA系を用いて変動を定量的に評価した。本スクリーニング系を用いて、天然化合物ライブラリーより活性化合物の1次スクリーニングを行った結果、抗菌活性を有する化合物、芽胞形成阻害活性を有する化合物、毒素産生阻害活性を有する化合物を、それぞれ142、35、7化合物見出すことが出来た。さらに高活性の化合物の絞り込みを進めるとともに、詳細な阻害活性について解析を進めている。