慢性低酸素環境に注目した乳がんの抗アンドロゲン薬抵抗性獲得機序の解明

点击翻译按钮获取中文摘要

前年度に引き続き、Cre recombinase (Cre)-loxP 部位特異的 DNA 組換えシステムを利用した、乳がんスフェロイド内における慢性低酸素環境の可視化のための培養細胞系の構築を試みた。アンドロゲン受容体を高発現する乳がん由来細胞株 MDA-MB453に対して、loxP-DsRed-loxP-eGFP発現ベクター系をレンチウイルスにより遺伝子導入した。レンチウイルスによる遺伝子導入により発現されたDsRedタンパク質の安定発現が蛍光顕微鏡下で確認された。続いて、DsRed発現を指標として、loxP-DsRed-loxP-eGFPが導入された単一の細胞クローンを限界希釈法により単離・培養を行い、複数の細胞クローンを得た。こうして得た細胞クローンに対して、低酸素応答配列（HRE）をプロモーター領域に有するCre発現システム（HRE-Cre）ををレンチウイルスにより遺伝子導入した。この細胞を低酸素チャンバー内で培養することにより長期間低酸素環境下に曝露し、誘導されたCreの作用によりDsRed遺伝子が除去されることで、新たに発現するeGFPの蛍光を指標として目的の細胞を選択中である。それらに加えて、非ステロイド性の抗アンドロゲン薬であるエンザルタミドに対する耐性を示す細胞株の作成を試みた。MDA-MB453をエンザルタミド存在下および通常酸素環境下で長期間培養し継代を繰り返すことで、生存・増殖する細胞を得た。今後は、これらの細胞の性質（遺伝子発現、細胞増殖率および薬物耐性など）の変化について解析予定である。