慢性低酸素環境に注目した乳がんの抗アンドロゲン薬抵抗性獲得機序の解明

以慢性低氧环境为中心阐明乳腺癌抗雄激素耐药机制

• 批准号: 21K08545
• 负责人: 今道 力敬
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Fukui Prefectural University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08545/
• 关键词: 低酸素環境; スフェロイド; 抗アンドロゲン薬抵抗性; 低酸素; アンドロゲン; 乳がん

前年度に引き続き、Cre recombinase (Cre)-loxP 部位特異的 DNA 組換えシステムを利用した、乳がんスフェロイド内における慢性低酸素環境の可視化のための培養細胞系の構築を試みた。アンドロゲン受容体を高発現する乳がん由来細胞株 MDA-MB453に対して、loxP-DsRed-loxP-eGFP発現ベクター系をレンチウイルスにより遺伝子導入した。レンチウイルスによる遺伝子導入により発現されたDsRedタンパク質の安定発現が蛍光顕微鏡下で確認された。続いて、DsRed発現を指標として、loxP-DsRed-loxP-eGFPが導入された単一の細胞クローンを限界希釈法により単離・培養を行い、複数の細胞クローンを得た。こうして得た細胞クローンに対して、低酸素応答配列（HRE）をプロモーター領域に有するCre発現システム（HRE-Cre）ををレンチウイルスにより遺伝子導入した。この細胞を低酸素チャンバー内で培養することにより長期間低酸素環境下に曝露し、誘導されたCreの作用によりDsRed遺伝子が除去されることで、新たに発現するeGFPの蛍光を指標として目的の細胞を選択中である。それらに加えて、非ステロイド性の抗アンドロゲン薬であるエンザルタミドに対する耐性を示す細胞株の作成を試みた。MDA-MB453をエンザルタミド存在下および通常酸素環境下で長期間培養し継代を繰り返すことで、生存・増殖する細胞を得た。今後は、これらの細胞の性質（遺伝子発現、細胞増殖率および薬物耐性など）の変化について解析予定である。

In the previous year, the DNA tissue with special features of Cre recombinase (Cre)-loxP has been tested for the use of low-acid, low-acid, low-acid enviroment. The cause of the disease is that the cell lines MDA-MB453 and loxP-DsRed-loxP-eGFP show that there is no significant difference between them. Please make sure that you are aware that the DsRed is stable and that you can confirm it under the light microphone. The word "DsRed" and the word "loxP-DsRed-loxP-eGFP" means that the number of cells is not correct, and that the number of cells is not valid. There are some problems in the field of Cre detection (HRE-Cre) in the fields of low acid concentration, low acid content, low acid content, low acid content In the environment of low acid content, long-term low-acid exposure, the effect of Cre, the effect of DsRed, the effect of low-acid exposure, the effect of low-acid exposure on long-term exposure in a low-acid environment, the effect of low-acid exposure, the effect of low-acid exposure on long-term low-acid exposure in low-acid environment, guide the effect of low-acid exposure in the environment of long-term low-acid exposure, and guide the effect of low-acid exposure in low-acid environment. The tolerance test showed that the cell line was tested in the presence of high tolerance. In the presence of MDA-MB453, it is common for generations to grow over a long period of time in an acid environment, and to survive. In the future, we need to know that the cell growth rate is very high, and the cell reproduction rate is very high.