大腸癌肝転移に関与する癌細胞由来マイクロRNAの同定と制御するメカニズムの解明

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本研究では、大腸がん肝転移の発生に関与する原発巣の癌細胞miRNAの同定と機能解析を行う。令和4年度は下記の研究を実施した。1. ステージIIIの原発腫瘍とステージIVの肝転移巣におけるこれら2つのmiRNAの発現レベルを調べた。具体的にはLCM法によってステージIII原発腫瘍並びにステージIV肝転移巣から癌細胞を採取し、qPCR実験をして、miR-106bとmiR-30bの発現レベルを調べた。2. 細胞レベルでmiR-106b及びmiR-30bによる細胞遊走と浸潤の影響をバリデーションした。昨年と同じようにmiR-106b低発現レベルを示すSW480にmiR-106b mimicを、miR-30b低発現レベルを示すLoVoにmiR-30b mimicを導入した。これらの細胞を使用して創傷治癒アッセイと浸潤アッセイを実行した。3. miR-106b及びmiR-30bが、がんの遊走と浸潤に影響のメカニズムを解明するため、RNA-シーケンス実験を実施した。具体的にはmiR-106b低発現レベルSW480にmiR-106b mimicを、miR-30b低発現レベルLoVoにmiR-30b mimicを導入し、これらの細胞サンプルのRNAを用いてRNA-シーケンスをして、miR-106b 及び miR-30bにより異常発現した遺伝子を調べた。4. miR-106b安定的な過剰発現細胞株を作成した。レンチウイルスを用いて、miR-106b安定的な過剰発現細胞株を作成した。