IL-17とがん幹細胞ニッチをターゲットにした新規分子標的療法の開発

开发针对 IL-17 和癌症干细胞生态位的新型分子靶向治疗

• 批准号: 21K08804
• 负责人: 早田 啓治
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Wakayama Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08804/
• 关键词: IL-17; がん幹細胞ニッチ; がん関連線維芽細胞; がん微小環境; 新生血管; 分子標的療法

本研究ではがん微小環境におけるIL-17ががん幹細胞ニッチ構築に及ぼす影響について新規に解明し、難治性消化器がんにおいてIL-17とがん幹細胞ニッチ（新生血管、がん関連線維芽細胞）を標的とした新しい分子標的療法の開発を目的とする。本研究を遂行することで、がん微小環境において慢性炎症を惹起するIL-17とがん幹細胞ニッチの一つであるがん関連線維芽細胞(CAFs: cancer associated fibroblasts)との関連性が明らかとなる。さらにIL-17制御を血管新生阻害剤、がん関連線維芽細胞阻害剤のシナジー効果によるがん幹細胞ニッチの破壊による新規分子標的療法を確立できれば、これまで難治性消化器がんであったスキルス胃がん、膵がんの対しての治療戦略が革新的に進歩するものと考える。本年度はがん微小環境におけるIL-17抑制が血管新生、がん幹細胞にあたえる影響について検討した。マウス大腸癌細胞株MC38、CT26 5×105細胞をC57BL/6マウス、BALB/cマウスに皮下投与し、腫瘍モデルを作成、Day5, 8, 11にAd-IL17 1×109PFU, Ad-IL-17 siRNA 1×109PFU, Ad-SNC 1×109PFU、PBSを腫瘍内投与した。Day14に腫瘍組織を採取し、新鮮凍結切片を作製し、抗CD31抗体にて血管内皮細胞を免疫化学組織染色にて評価した。さらに腫瘍内のVEGFタンパク発現をウエスタンブロットにて定量化した。がん幹細胞の発現を評価するために、腫瘍組織からFicoll2層遠心分離にて腫瘍細胞を分離し、FACSでside population (SP)にて評価した。

This study aims to develop new molecular target therapies for stem cell (neovascularization, associated vascular cells) targeting in microenvironments and new rules for understanding and understanding the effects of IL-17 on stem cell construction and development of refractory digestive organs. When this study was carried out, the relationship between IL-17 and stem cells (CAFs: cancer associated fibroblasts), which cause chronic inflammation in a small environment, is clear. IL-17 inhibits angiogenesis and is associated with the development of novel molecular target therapies for stem cell apoptosis, including the development of novel therapies for refractory digestive tract diseases. This year, IL-17 inhibits angiogenesis in micro-environments and affects stem cells. Colorectal cancer cell lines MC38, CT26 5×105 cells were injected subcutaneously with Ad-IL17 1×109PFU, Ad-IL-17 siRNA 1 × 109 PFU, Ad-SNC 1×109 PFU and PBS on Day5, 8 and 11. On Day14, tumor tissue was taken, freshly frozen sections were prepared, anti-CD31 antibodies were used, and vascular endothelial cells were evaluated by immunohistochemical staining. The VEGF gene in the tumor was detected and quantified. Evaluation of stem cell development, tumor tissue, Ficoll2-layer remote isolation, tumor cell isolation, FACS side population (SP)