アデノ随伴ウイルスを用いた痛みの遺伝子治療の基礎的基盤の構築

为利用腺相关病毒进行疼痛基因治疗奠定基础

• 批准号: 21K08940
• 负责人: 川田 大輔
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Asahikawa Medical College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08940/
• 关键词: GAD67; GABA; 遺伝子治療; ウイルスベクター; 痛み; アデノ随伴ウイルス

近年の医学の発展により遺伝子治療は多くの領域で注目されており、中でもウイルスベクターを用いた遺伝子治療は、がん治療、代謝疾患、神経疾患等の分野で臨床応用が既に開始している。しかしながら痛みに対する遺伝子治療は未だに確立されていない。我々は今までに痛みの遺伝子治療の有用性や神経障害性疼痛の機序を解明する研究成果を報告してきた。本研究はグルタミン酸デカルボキシラーゼ(GAD)67を発現させ脊髄後角のγ-アミノ酪酸 (GABA) 合成を促進するウイルスベクターを用いた遺伝子治療の有用性を明らかにし、その鎮痛機序を解明することを目的としている。本研究ではまずはじめにGABA産生の促進のためGAD67を導入するアデノ随伴ウイルス（AAV）ベクターを作成した。AAVベクターには神経細胞特異的に標的遺伝子を発現させるためのプロモーターを装備させ、神経組織でのみGABA産生が促進する機能を付加している。次に作成したAAVベクターの機能評価を行った。機能評価には初代培養神経細胞および実験動物（ラット）を用いた。緑色蛍光タンパク質（GFP）をサイトメガロウイルス（CMV）またはシナプシンⅠ（SYN）プロモーター制御下で発現するAAVベクター（CMV-AAVベクターおよびSYN-AAVベクター）を作成した。この2種のAAVベクターをラットに髄注しPCR法及び免疫染色法を用いて脊髄における導入遺伝子の発現を調べた。PCR法において、CMV-AAVベクター投与群およびSYN-AAVベクター投与群の両群で、ラット脊髄でのGFP発現が誘導された。免疫染色法では、SYN-AAVベクター投与群でのみ神経細胞に特異的なGFP発現が認められた。本研究により、SYNプロモーターを持つAAVベクターは、ラット脊髄の神経細胞へ特異的に標的遺伝子を導入する性質を持つことが明らかになった。

Recent の medical の 発 exhibition に よ り heritage 伝 son treatment more than は く の field で attention さ れ て お り, medium で も ウ イ ル ス ベ ク タ ー を with い た heritage 伝 treatment は, が ん, metabolic disorders, god 経 disorders such as clinical 応 の eset で with が having begun に し て い る. <s:1> ながら ながら pain みに treatment of する 伝 <s:1> no だに establishment of されて な な な みに I 々 は today ま で に pain み の heritage 伝 son treatment の usefulness や god 経 handicap of sexual pain の machine sequence を interpret す る research report を し て き た. This study は グ ル タ ミ ン acid デ カ ル ボ キ シ ラ ー ゼ (GAD) 67 を 発 now さ せ Angle after spinal marrow の gamma ア ミ ノ butyric acid (GABA) synthetic を promote す る ウ イ ル ス ベ ク タ ー を with い た heritage 伝 son treatment の usefulness を Ming ら か に し, そ の analgesia machine sequence を interpret す る こ と を purpose と し て い る. This study で は ま ず は じ め に GABA production の stimulates の た め GAD67 を import す る ア デ ノ with accompanying ウ イ ル ス (AAV) ベ ク タ ー を made し た. AAV ベ ク タ ー に は に mark of god 経 cell specific 伝 son を 発 now さ せ る た め の プ ロ モ ー タ ー を equipment さ せ, god 経 で の み GABA production が stimulates す る function を plus し て い る. This に can be made into a った たAAVベ タ タ <s:1> <s:1> function of evaluating 価を and った. Functional evaluation: 価に 価に primary culture of economic cells および experimental animals (ラット) を for た た. Green light 蛍 タ ン パ ク mass (GFP) を サ イ ト メ ガ ロ ウ イ ル ス (CMV) ま た は シ ナ プ シ ン Ⅰ (SYN) プ ロ モ ー タ ー under the system of imperial で 発 now す る AAV ベ ク タ ー (CMV - AAV ベ ク タ ー お よ び SYN - AAV ベ ク タ ー) を made し た. こ の two の AAV ベ ク タ ー を ラ ッ ト に marrow injection し PCR method and び immune staining を with い て spinal marrow に お け る import legacy 伝 son の 発 now を adjustable べ た. PCR method に お い て, CMV - AAV ベ ク タ ー cast with group of お よ び SYN - AAV ベ ク タ ー cast with group of の struck group で, ラ ッ ト spinal marrow で の GFP 発 now が induced さ れ た. Immune staining で は, SYN - AAV ベ ク タ ー cast with group of で の み god 経 cells に specific な GFP 発 が now recognize め ら れ た. This study に よ り, SYN プ ロ モ ー タ ー を hold つ AAV ベ ク タ ー は, ラ ッ ト spinal marrow の god 経 cells へ に mark of specific 伝 son を import す る nature を hold つ こ と が Ming ら か に な っ た.

项目成果

神経細胞特異的に標的遺伝子を発現させるアデノ随伴ウイルスベクターの機能評価

在神经细胞中特异性表达靶基因的腺相关病毒载体的功能评估

• 发表时间: 2022
• 作者: 佐藤遥;神田恵;川田大輔;神田浩嗣
• 通讯作者: 神田浩嗣

γアミノ酪酸の産生を亢進させるアデノ随伴ウイルスベクターの機能評価

增强γ-氨基丁酸产量的腺相关病毒载体的功能评估

• 发表时间: 2021
• 作者: 小山恭平;河村あさみ;川田友美;川田大輔;奥田勝博;中澤 瞳;神田浩嗣
• 通讯作者: 神田浩嗣