WNTアンタゴニストSFRP5によるWNT非依存的な骨代謝調節機構の解明

WNT拮抗剂SFRP5阐明不依赖WNT的骨代谢调节机制

• 批准号: 21K09216
• 负责人: 村上 康平
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Okayama University of Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09216/
• 关键词: WNTシグナル; 骨芽細胞; SFRP5; 骨形成; 骨代謝; Sfrp5; Wntシグナル

多くのWNTリガンドは骨形成を促進する。そのため、既知のWNTアンタゴニストは骨形成を抑制し、骨量を減少させる。Secreted frizzled-related protein 5（Sfrp5）は、脂肪細胞が分泌するWNTアンタゴニストである。申請者はSfrp5欠損マウスの骨を解析し、Sfrp5が破骨細胞の形成を抑制し、骨芽細胞の分化を促進することで、骨量を増加させることを発見した。本申請課題では、Sfrp5の骨代謝調節メカニズムを明らかにし、WNTアンタゴニストSfrp5の新たな一面を解き明かす。研究計画に則って、Sfrp5の作用を生体で確かめる実験を行った。Sfrp5または蛍光レポーター（ZsGreen）を過剰発現するアデノ随伴ウイルスを作製した。これを8週齢のマウスに静脈内投与したところ、骨芽細胞、骨細胞、破骨細胞での蛍光レポーターの発現が確認された。処置後4週目において、Sfrp5の過剰発現によって破骨細胞の形成は抑制された。しかしながら、骨量の増加が観察されなかった。また、Sfrp5が骨芽細胞の分化を促進する機序を解明するための実験を行った。共免疫沈降・質量分析により、Sfrp5と相互作用する候補分子を複数みつけた。これらに対するshRNAを発現する組換えアデノウイルスを作製した。組換えアデノウイルスを骨芽細胞に感染させ、骨芽細胞の分化を抑制する因子を複数みつけた。つまり、Sfrp5は骨芽細胞の分化を抑制する因子を拮抗することで、骨芽細胞の分化を抑制する可能性が考えられた。骨芽細胞の微量転写開始点解析技術（CAGE）により、Sfrp5が活性化する転写因子の候補を同定した。これらの転写因子を発現させる組換えアデノウイルスを作製し、骨芽細胞に発現させたところ、骨芽細胞の分化を促進する転写因子Xを同定した。今後、Sfrp5が転写因子Xを活性化させる機序を解明する。

The formation of multiple WNT fragments is promoted. It is known that bone formation is inhibited and bone mass is reduced. Secreted frizzled-related protein 5 (Sfrp5) is secreted by fat cells. The applicant found that Sfrp5 could inhibit osteoclast formation, promote osteoblast differentiation, and increase bone mass. The subject of the present application is to clarify the new aspects of bone metabolism regulation of Sfrp 5. The research project is designed to determine the role of Sfrp5 in organisms. Sfrp5 is the only way to control the flow of light. The development of osteoblasts, osteocytes and osteoclasts was confirmed by intravenous administration at 8 weeks. After 4 weeks of treatment, Sfrp5 was detected and osteoclast formation was inhibited. The increase in bone mass was observed. The mechanism of promoting differentiation of bone bud cells by Sfrp5 was clarified. Co-immunoprecipitation, mass analysis, Sfrp5 interaction, candidate molecules, etc. This is the first time A number of factors that inhibit bone bud cell infection and differentiation are involved in the formation of bone bud cells. Sfrp5 is an inhibitor of bone bud differentiation. The candidate for Sfrp5 activation factor was determined by CAGE. The expression of these genes is regulated by the expression of gene X, which promotes the differentiation of bone bud cells. In the future, Sfrp5 is the key factor to explain the activation mechanism of X.

项目成果

Down-regulation of PD-L2 is a poor prognostic marker in dogs with high-grade mast cell tumor

PD-L2 下调是患有高级别肥大细胞肿瘤的犬的不良预后标志物

• 发表时间: 2023
• 作者: Kohei Murakami;Daichi Hanai;Ryusei Kimura;Ikki Mitsui;Jiro Miyamae;Akira Matsuda;Hiroaki Hemmi
• 通讯作者: Hiroaki Hemmi

Expression profile of immunoregulatory factors in canine tumors

犬肿瘤中免疫调节因子的表达谱

• DOI: 10.1016/j.vetimm.2022.110505
• 发表时间: 2022
• 期刊: Veterinary Immunology and Immunopathology
• 影响因子: 1.8
• 作者: Murakami Kohei;Miyatake Saki;Miyamae Jiro;Saeki Kanna;Shinya Mizutani;Akashi Natsuki;Mitsui Ikki;Kobayashi Kosuke;Saeki Kohei;Maeta Noritaka;Kanda Teppei;Okamura Yasuhiko;Hemmi Hiroaki
• 通讯作者: Hemmi Hiroaki

犬の腫瘍における免疫制御分子の発現プロファイル

犬肿瘤中免疫调节分子的表达谱

• 发表时间: 2023
• 作者: 宮武咲妃;宮前二朗;邊見弘明;村上康平
• 通讯作者: 村上康平

イヌ肺腺癌より樹立した上皮系および間葉系様細胞株の性状解析

犬肺腺癌上皮样和间质样细胞系的特征分析

• 发表时间: 2022
• 作者: Takeuchi A;Yamamoto N;Ohmori T;Hayashi K;Miwa S;Igarashi K;Higuchi T;Abe K;Yonezawa H;Morinaga S;Araki Y;Asano Y;Saito S;Tsuchiya H.;Teramoto A;小林宏祐，村上康平，佐伯亘平，杉山晶彦
• 通讯作者: 小林宏祐，村上康平，佐伯亘平，杉山晶彦

Inhibitor of protein kinase N3 suppresses excessive bone resorption in ovariectomized mice

• DOI: 10.1007/s00774-021-01296-1
• 发表时间: 2022-01
• 期刊: Journal of Bone and Mineral Metabolism
• 影响因子: 3.3
• 作者: Shunsuke Uehara;H. Mukai;T. Yamashita;M. Koide;Kohei Murakami;N. Udagawa;Yasuhiro Kobayashi