WNTアンタゴニストSFRP5によるWNT非依存的な骨代謝調節機構の解明

WNT拮抗剂SFRP5阐明不依赖WNT的骨代谢调节机制

• 批准号: 21K09216
• 负责人: 村上 康平
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Okayama University of Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09216/
• 关键词: WNTシグナル; 骨芽細胞; SFRP5; 骨形成; 骨代謝; Sfrp5; Wntシグナル

多くのWNTリガンドは骨形成を促進する。そのため、既知のWNTアンタゴニストは骨形成を抑制し、骨量を減少させる。Secreted frizzled-related protein 5（Sfrp5）は、脂肪細胞が分泌するWNTアンタゴニストである。申請者はSfrp5欠損マウスの骨を解析し、Sfrp5が破骨細胞の形成を抑制し、骨芽細胞の分化を促進することで、骨量を増加させることを発見した。本申請課題では、Sfrp5の骨代謝調節メカニズムを明らかにし、WNTアンタゴニストSfrp5の新たな一面を解き明かす。研究計画に則って、Sfrp5の作用を生体で確かめる実験を行った。Sfrp5または蛍光レポーター（ZsGreen）を過剰発現するアデノ随伴ウイルスを作製した。これを8週齢のマウスに静脈内投与したところ、骨芽細胞、骨細胞、破骨細胞での蛍光レポーターの発現が確認された。処置後4週目において、Sfrp5の過剰発現によって破骨細胞の形成は抑制された。しかしながら、骨量の増加が観察されなかった。また、Sfrp5が骨芽細胞の分化を促進する機序を解明するための実験を行った。共免疫沈降・質量分析により、Sfrp5と相互作用する候補分子を複数みつけた。これらに対するshRNAを発現する組換えアデノウイルスを作製した。組換えアデノウイルスを骨芽細胞に感染させ、骨芽細胞の分化を抑制する因子を複数みつけた。つまり、Sfrp5は骨芽細胞の分化を抑制する因子を拮抗することで、骨芽細胞の分化を抑制する可能性が考えられた。骨芽細胞の微量転写開始点解析技術（CAGE）により、Sfrp5が活性化する転写因子の候補を同定した。これらの転写因子を発現させる組換えアデノウイルスを作製し、骨芽細胞に発現させたところ、骨芽細胞の分化を促進する転写因子Xを同定した。今後、Sfrp5が転写因子Xを活性化させる機序を解明する。

More く く WNTリガ ド ド bone formation を promotes する. Youdaoplaceholder0 ため ため, it is known that <s:1> WNTア タゴニスト タゴニスト bone formation を is inhibited by <s:1> and bone mass を is reduced by させる. Secreted frizzled-related protein 5 (Sfrp5) が, adipocytes が secrete するWNTア タゴニストである タゴニストである. Applicants は Sfrp5 owe loss マ ウ ス の bone を analytical し, Sfrp5 の が osteoclast formation を inhibit し, bone bud cells の を promote す る こ と で, bone mass を raised さ せ る こ と を 発 see し た. This application subject で は, Sfrp5 の bone metabolic regulation メ カ ニ ズ ム を Ming ら か に し, WNT ア ン タ ゴ ニ ス ト Sfrp5 の new た な side を solution き Ming か す. The research plan に indicates that って, Sfrp5 <s:1> acts on を organisms で, and を める experiments を conduct った. Sfrp5 ま た は 蛍 light レ ポ ー タ ー (ZsGreen) を turning 発 now す る ア デ ノ with accompanying ウ イ ル ス を cropping し た. こ れ を 8 weeks 齢 の マ ウ ス に cast with intravenous し た と こ ろ, bone bud cells, bone cells, osteoclasts で の 蛍 light レ ポ ー タ ー の 発 が now confirmed さ れ た. After 4 weeks of treatment, にお にお て て and Sfrp5 <s:1> were found to have によって inhibition of osteoclast <s:1> formation された. <s:1> った ながら, <s:1> increase in bone mass が観 observe されな った った. Youdaoplaceholder0, Sfrp5が, <s:1> differentiation of bone bud cells を, promotion of する mechanism を, を explanation of するため <s:1> experiment を process った. Co-immunoprecipitation · mass analysis によ によ, Sfrp5と interaction する candidate molecules を complex numbers み けた けた けた. Youdaoplaceholder6 れらに issues する groups for するshRNAを to replace えアデノウ スを and スを スを to produce た. Group in え ア デ ノ ウ イ ル ス を bone cells in bud に さ せ, bone bud cells の を suppression す る factor を plural み つ け た. つ ま り, Sfrp5 は bud cells の を inhibit bone す る factor を antagonism す る こ と で, bone bud cells の を suppression す る possibility が exam え ら れ た. Bone bud cell <s:1> trace 転 writing initiation point resolution technology (CAGE) によ によ, Sfrp5が activation する転 writing factor <s:1> reserve を fixed <s:1> た. こ れ ら の planning write factor を 発 now さ せ る group in え ア デ ノ ウ イ ル ス を cropping し bud cells, bone に 発 now さ せ た と こ ろ, bone bud cells の を promote す る planning write factor X を with fixed し た. In the future, write the sequence of factor Xを activation させる in Sfrp5が転 to explain する.

项目成果

Down-regulation of PD-L2 is a poor prognostic marker in dogs with high-grade mast cell tumor

PD-L2 下调是患有高级别肥大细胞肿瘤的犬的不良预后标志物

• 发表时间: 2023
• 作者: Kohei Murakami;Daichi Hanai;Ryusei Kimura;Ikki Mitsui;Jiro Miyamae;Akira Matsuda;Hiroaki Hemmi
• 通讯作者: Hiroaki Hemmi

Expression profile of immunoregulatory factors in canine tumors

犬肿瘤中免疫调节因子的表达谱

• DOI: 10.1016/j.vetimm.2022.110505
• 发表时间: 2022
• 期刊: Veterinary Immunology and Immunopathology
• 影响因子: 1.8
• 作者: Murakami Kohei;Miyatake Saki;Miyamae Jiro;Saeki Kanna;Shinya Mizutani;Akashi Natsuki;Mitsui Ikki;Kobayashi Kosuke;Saeki Kohei;Maeta Noritaka;Kanda Teppei;Okamura Yasuhiko;Hemmi Hiroaki
• 通讯作者: Hemmi Hiroaki

犬の腫瘍における免疫制御分子の発現プロファイル

犬肿瘤中免疫调节分子的表达谱

• 发表时间: 2023
• 作者: 宮武咲妃;宮前二朗;邊見弘明;村上康平
• 通讯作者: 村上康平

イヌ肺腺癌より樹立した上皮系および間葉系様細胞株の性状解析

犬肺腺癌上皮样和间质样细胞系的特征分析

• 发表时间: 2022
• 作者: Takeuchi A;Yamamoto N;Ohmori T;Hayashi K;Miwa S;Igarashi K;Higuchi T;Abe K;Yonezawa H;Morinaga S;Araki Y;Asano Y;Saito S;Tsuchiya H.;Teramoto A;小林宏祐，村上康平，佐伯亘平，杉山晶彦
• 通讯作者: 小林宏祐，村上康平，佐伯亘平，杉山晶彦

Inhibitor of protein kinase N3 suppresses excessive bone resorption in ovariectomized mice

• DOI: 10.1007/s00774-021-01296-1
• 发表时间: 2022-01
• 期刊: Journal of Bone and Mineral Metabolism
• 影响因子: 3.3
• 作者: Shunsuke Uehara;H. Mukai;T. Yamashita;M. Koide;Kohei Murakami;N. Udagawa;Yasuhiro Kobayashi