切断四肢保存のための人工赤血球灌流療法の開発

人工红细胞灌注疗法用于截肢保存的研究进展

• 批准号: 21K09300
• 负责人: 四宮 陸雄
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09300/
• 关键词: 切断四肢灌流療法; 切断四肢保存; 自己血灌流

体外灌流モデルの至適条件の検討に時間を費やした。雄のSDラットを麻酔下に全採血を行い、屠殺する。血液はヘパリンと混和の上、輸血用チューブのろ過網を通し凝血塊を除去する。血液を1000G 30分間、遠心分離して白血球・血小板層をマイクロピペットで可及的に除去する。血液を5%アルブミン付加した生理食塩水で希釈しヘマトクリット10%で50mlとなるよう調整する。ラットは左後肢を切断し大腿動脈に専用チューブを挿入，専用チャンバー内に置く。灌流回路は閉鎖回路とした。灌流速度は1ml/分とした。灌流液にヘパリン、ブドウ糖、インスリン、炭酸水素ナト リウムを定量で持続投与する。灌流回路は腎臓・肝臓に当たる排泄機能を有していない。自己血を用いた灌流液は赤血球 の溶血と制御困難なカリウムの増加を来たすため、12時間の灌流時間を3時間毎に区切り、同種血を用いた新しい灌流液に交換する。 新しい灌流液は他のラットから調達・作製する。静脈血は60分毎に血液ガス分析検査を行い、電解質、乳酸値、酸素化などを確認する。3時間毎に廃棄される灌流液から生化学検査（クレアチンキナーゼ）、浸透圧、溶血を確認する。副作用である浮腫の程度を評価すべく、灌流前後の下肢重量から増加比 （灌流後重量/灌流前重量-1）を計測した。組織学的評価として、前脛骨筋と腓腹筋内側頭から4 sampleを採取し、4%パラホルマリン で浸漬固定の上でパラフィン切片を作製し、過去の報告に従い、筋肉の虚血損傷の程度を評価する。以上の実験をSDラットを用いて、実験室室温環境のモデル（24-26度、室温群）と，ラットの体温に近づけるため38度設定の加温機で専用チャンバーを加温したモデル(33-35度、加温群)で行い、室温群の方が浮腫が有意に少なく、組織学的にも損傷が少ない傾向であった。以上の実験をLewisラットの雄のモデルで再度おこなった。

The time required for in vitro perfusion to reach optimal conditions is limited. The male SD was killed in the process. The blood is mixed and transfused, and the clot is removed. 1000G 30 minutes, telecentric separation of white blood cells, platelet layer, accessible removal Blood 5% off, physiological water 10% off, adjustment The left hind leg was cut off and the thigh artery was inserted into the left thigh. The perfusion circuit is closed. Perfusion rate is 1ml/min. Perfusion fluid, glucose, glucose, carbon and water are quantitatively administered. The perfusion circuit has the function of kidney and liver excretion. The hemolysis of hemocytes in the perfusate of the same blood is difficult to control, and the increase of the perfusion time is difficult. The perfusion time of 12 hours is 3 hours. The perfusion time of the same blood is exchanged. New perfusate is used to regulate and control the flow of fluid. Venous blood 60 minutes each blood analysis test, electrolyte, lactic acid value, acid change to confirm 3. Perfusion fluid was collected every day for biochemical examination, osmotic pressure and hemolysis confirmation. Side effects were evaluated by weight loss, weight gain of lower limbs before and after perfusion (weight after perfusion/weight before perfusion-1). Histological evaluation: 4 samples taken from the medial head of the anterior tibial tendon, 4% from the anterior fibular tendon The temperature of the room temperature environment (24-26 degrees, room temperature group) and the temperature of the room temperature environment (38 degrees, room temperature group) are close to each other. The temperature of the room temperature environment is close to 38 degrees. The temperature of the room temperature group is close to 38 degrees. The temperature of the room temperature environment is close to 33 degrees. The temperature of the room temperature group is close to 38 degrees. The temperature of the room temperature group is close to 33 degrees. The temperature of the room temperature group is close to 35 degrees. The temperature of the room temperature group is close to 38 degrees. The temperature of the room temperature group is close to 33 degrees. The temperature group is close to 38 degrees. The temperature of the room temperature group is close to 38 degrees. The temperature of The above is the first time that Lewis has been involved in this.

项目成果

ラット切断肢の体外灌流における温度条件の違いの検討

大鼠断肢体外灌注过程中温度条件差异的检测

• 发表时间: 2023
• 作者: 横田 厳;四宮 陸雄;石橋 栄樹;林 悠太;安達 伸生
• 通讯作者: 安達 伸生

ラット骨格筋保存を目指した体外灌流の試み

尝试体外灌注以保存大鼠骨骼肌

• 发表时间: 2021
• 作者: 横関雄司;内田健太郎;向井務晃;迎学;井上玄;宮城正行;高相晶士;横田厳，四宮陸雄
• 通讯作者: 横田厳，四宮陸雄