骨肉腫幹細胞モデルと微小環境のクロストークの解明とそれらを標的にした治療戦略

本研究では、これまでの解析で見出したRAGEによって誘導される骨肉腫幹細胞モデルで、miR34aとWnt5aが重要である点から、骨肉腫幹細胞の微小環境に対する作用、miR34aとWnt5aの微小環境に与える影響をin-vitroで解析し、さらにマウス骨肉腫細胞を免疫保持マウスに移植し、微小環境を標的とした治療薬（免疫チェックポイント阻害薬、マルチキナーゼ阻害薬）と合成miR34aやWnt5a阻害薬を併用することで、がん幹細胞と微小環境を標的とした治療効果を解析し新たな治療戦略創出へと繋げることを目的としている。2022年度は以下の解析を行った。1. マウス骨肉腫細胞株であるDunnでマウス型RAGEと内在性分泌型RAGEが発現していることを遺伝子発現解析（RT-PCR）にて確認した。また、高転移株であるLM8よりもDunnの方がマウス型RAGEと内在性分泌型RAGEの発現が高く、Dunnのスフェロイド形成能がLM8よりも高いという結果であった。2. Dunnにヒト型RAGE遺伝子とmockを導入し、安定発現していることを確認した。3.LM8-RAGE、LM8-Mockをマウスに移植し、LM8-RAGEはLM8-Mockよりも移植部位での腫瘍形成脳が高かった。4. 骨肉腫組織（手術検体）におけるa miR-34の発現の解析をIn-situ-hybridizationで症例数を増やして行い、陽性率と臨床経過や原発巣と転移巣での発現率に相関はない印象であったが、発現している部位が症例ごとに腫瘍内と周囲組織で異なっていた。さらにRAGEの染色も追加して、RAGEの発現とmiR-34aの発現の相関を解析している。

本研究では、これまでの解析で見出したRAGEによって誘導される骨肉腫幹細胞モデルで、miR34aとWnt5aが重要である点から、骨肉腫幹細胞の微小環境に対する作用、miR34aとWnt5aの微小環境に与える影響をin-vitroで解析し、さらにマウス骨肉腫細胞を免疫保持マウスに移植し、微小環境を標的とした治療薬（免疫チェックポイント阻害薬、マルチキナーゼ阻害薬）と合成miR34aやWnt5a阻害薬を併用することで、がん幹細胞と微小環境を標的とした治療効果を解析し新たな治療戦略創出へと繋げることを目的としている。2022年度は以下の解析を行った。1. マウス骨肉腫細胞株であるDunnでマウス型RAGEと内在性分泌型RAGEが発現していることを遺伝子発現解析（RT-PCR）にて確認した。また、高転移株であるLM8よりもDunnの方がマウス型RAGEと内在性分泌型RAGEの発現が高く、Dunnのスフェロイド形成能がLM8よりも高いという結果であった。2. Dunnにヒト型RAGE遺伝子とmockを導入し、安定発現していることを確認した。3.LM8-RAGE、LM8-Mockをマウスに移植し、LM8-RAGEはLM8-Mockよりも移植部位での腫瘍形成脳が高かった。4. 骨肉腫組織（手術検体）におけるa miR-34の発現の解析をIn-situ-hybridizationで症例数を増やして行い、陽性率と臨床経過や原発巣と転移巣での発現率に相関はない印象であったが、発現している部位が症例ごとに腫瘍内と周囲組織で異なっていた。さらにRAGEの染色も追加して、RAGEの発現とmiR-34aの発現の相関を解析している。