腎移植後の交感神経再生性変化と間質線維化に関する網羅解析

移植腎の長期生着は平均17年と依然として短く、病理学的に、尿細管萎縮/間質線維化(IF/TA)の進展である。移植腎とNativeの腎炎/腎症の違いは、免疫抑制剤の使用と神経系やリンパ管系の外科的断裂が挙げられる。最近、腎臓の神経系の遮断がIF/TAに抑制的に働くと報告され、「除神経後の神経再生が強いほど間質線維化及び尿細管萎縮が進展しやすい」という仮説の検証が、本研究の目的である。これまでに交感神経マーカ－Tyrosinehydroxylase(Abcam,Bristol,UK)の免疫染色を検証し、腎移植術に伴う徐神経後の退行性変化と、その後の再生性変化を観察した。また、腎線維化関連分子機構をNanostring社の開発したnCounter;にて検証するため、RNeasy FFPE kit、Qiagenを用いて RNAを抽出し目標とする回収量が達成できることを確認した。本年度は、症例の抽出の検討およびnCounter;による測定の外注(アズワン社)およびnCounterで使用するバイオインフォマティクスのプラットフォームであるRosalind;のシュミレーションを行った。nCounterを用いた網羅解析では20症例まで検証可能であることを確認し、実際に解析する症例については、陰性コントロールとして0hr生検5例、長期に安定した5例、カルシニューリン阻害剤によるIF/TA 5例、慢性拒絶反応5例を対象とすることとした。また、 RNAサンプルの条件（A260/A280：1.7-2.3、A260/A230：1.8-2.3 およびBioAnalyzerによるDV300測定、input推奨量250ng以上）を確認した。また、Rosalind;の解析手法を習得した。以上より、現在、実際のサンプルを用いてデータを解析を行う準備が整った状況である。

移植腎の長期生着は平均17年と依然として短く、病理学的に、尿細管萎縮/間質線維化(IF/TA)の進展である。移植腎とNativeの腎炎/腎症の違いは、免疫抑制剤の使用と神経系やリンパ管系の外科的断裂が挙げられる。最近、腎臓の神経系の遮断がIF/TAに抑制的に働くと報告され、「除神経後の神経再生が強いほど間質線維化及び尿細管萎縮が進展しやすい」という仮説の検証が、本研究の目的である。これまでに交感神経マーカ－Tyrosinehydroxylase(Abcam,Bristol,UK)の免疫染色を検証し、腎移植術に伴う徐神経後の退行性変化と、その後の再生性変化を観察した。また、腎線維化関連分子機構をNanostring社の開発したnCounter;にて検証するため、RNeasy FFPE kit、Qiagenを用いて RNAを抽出し目標とする回収量が達成できることを確認した。本年度は、症例の抽出の検討およびnCounter;による測定の外注(アズワン社)およびnCounterで使用するバイオインフォマティクスのプラットフォームであるRosalind;のシュミレーションを行った。nCounterを用いた網羅解析では20症例まで検証可能であることを確認し、実際に解析する症例については、陰性コントロールとして0hr生検5例、長期に安定した5例、カルシニューリン阻害剤によるIF/TA 5例、慢性拒絶反応5例を対象とすることとした。また、 RNAサンプルの条件（A260/A280：1.7-2.3、A260/A230：1.8-2.3 およびBioAnalyzerによるDV300測定、input推奨量250ng以上）を確認した。また、Rosalind;の解析手法を習得した。以上より、現在、実際のサンプルを用いてデータを解析を行う準備が整った状況である。