腎移植後の交感神経再生性変化と間質線維化に関する網羅解析

肾移植术后交感神经再生变化及间质纤维化的综合分析

• 批准号: 21K09358
• 负责人: 山本 泉
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09358/
• 关键词: 移植腎; 交感神経; 尿細管間質線維化; mRNA解析; 徐神経; 腎移植; 腎線維化

移植腎の長期生着は平均17年と依然として短く、病理学的に、尿細管萎縮/間質線維化(IF/TA)の進展である。移植腎とNativeの腎炎/腎症の違いは、免疫抑制剤の使用と神経系やリンパ管系の外科的断裂が挙げられる。最近、腎臓の神経系の遮断がIF/TAに抑制的に働くと報告され、「除神経後の神経再生が強いほど間質線維化及び尿細管萎縮が進展しやすい」という仮説の検証が、本研究の目的である。これまでに交感神経マーカ－Tyrosinehydroxylase(Abcam,Bristol,UK)の免疫染色を検証し、腎移植術に伴う徐神経後の退行性変化と、その後の再生性変化を観察した。また、腎線維化関連分子機構をNanostring社の開発したnCounter;にて検証するため、RNeasy FFPE kit、Qiagenを用いて RNAを抽出し目標とする回収量が達成できることを確認した。本年度は、症例の抽出の検討およびnCounter;による測定の外注(アズワン社)およびnCounterで使用するバイオインフォマティクスのプラットフォームであるRosalind;のシュミレーションを行った。nCounterを用いた網羅解析では20症例まで検証可能であることを確認し、実際に解析する症例については、陰性コントロールとして0hr生検5例、長期に安定した5例、カルシニューリン阻害剤によるIF/TA 5例、慢性拒絶反応5例を対象とすることとした。また、 RNAサンプルの条件（A260/A280：1.7-2.3、A260/A230：1.8-2.3 およびBioAnalyzerによるDV300測定、input推奨量250ng以上）を確認した。また、Rosalind;の解析手法を習得した。以上より、現在、実際のサンプルを用いてデータを解析を行う準備が整った状況である。

Long-term survival of transplanted kidney is still short after an average of 17 years, pathological changes, and progression of urinary tubule atrophy/interstitial maintenance (IF/TA). Kidney transplantation, Nephritis/Nephropathy, Use of immunosuppressive agents, Surgical rupture of the nervous system and renal system Recently, a report on the inhibition of IF/TA in the renal nervous system was published,"In addition to post-neurologic regeneration, there is progress in interstitial maintenance and urinary tubule atrophy." Immunostaining for sympathetic neurokinase (Abcam,Bristol,UK), renal transplantation with post-neurodegenerative changes, and post-regenerative changes were observed. The development of the molecular mechanism involved in kidney maintenance is confirmed by the detection of RNA by RNeasy FFPE kit and Qiagen This year, the number of cases extracted from the survey and the number of cases detected by the survey and the number of cases detected by the survey were increased. NCounter analysis included 20 cases of possible diagnosis, 5 cases of negative diagnosis, 5 cases of long-term stable diagnosis, 5 cases of IF/TA, 5 cases of chronic rejection and 5 cases of negative diagnosis. The conditions for RNA detection (A260/A280: 1.7-2.3, A260/A230: 1.8-2.3) and BioAnalyzer DV300 measurement, and the amount of input more than 250ng) were confirmed. Rosalind; the analytical technique is learned. The above is the current situation and the actual situation.