キスペプチン発現解析によるメラトニンの思春期抑制機構の解明

松果体から分泌されるホルモン、メラトニンは、哺乳類の思春期開始に抑制的な働きを持つと報告されてきたが、このホルモンがどの細胞をターゲットにその抑制作用を示しているのかは明らかでない。本研究では、哺乳類の性成熟に必須の神経ペプチドであるキスペプチンを産生するキスペプチンニューロンに着目し、メラトニン、及びメラトニン分泌に影響する明暗周期が思春期のラットのキスペプチン発現に及ぼす影響を明らかにすることを目的とする。前年度に得られた、2週齢から連日メラトニン投与を受けた幼若個体の脳サンプルを用いて、免疫組織化学によりキスペプチン発現の解析を進めた。前年度に使用した抗キスペプチン抗体では特異的な染色像が得られなかったが、今年度新たに使用を始めた抗体では特異性の高い組織像が得られた。しかしながら、可視化できたのは神経線維に限られ、細胞体を確認できなかったためキスペプチンニューロン数の計測はかなわなかった。これは対象としている週齢でのタンパク発現量と局在を反映していると考えられる。そこで、細胞体の可視化のためin situ hybridizationに用いるRNAプローブの作製を進め、プラスミド精製までを終了した。また、発達期にメラトニンが作用しない状態を作り出すため、生後2週齢の動物に松果体摘除手術をおこなったが、サンプリングが困難であったため、今後は変則明暗周期によりメラトニンの絶対量、および分泌パターンを変動させる飼育条件下で生育したラットを用いて脳内のキスペプチン発現を解析する実験を進めていくよう計画している。

松果体から分泌されるホルモン、メラトニンは、哺乳類の思春期開始に抑制的な働きを持つと報告されてきたが、このホルモンがどの細胞をターゲットにその抑制作用を示しているのかは明らかでない。本研究では、哺乳類の性成熟に必須の神経ペプチドであるキスペプチンを産生するキスペプチンニューロンに着目し、メラトニン、及びメラトニン分泌に影響する明暗周期が思春期のラットのキスペプチン発現に及ぼす影響を明らかにすることを目的とする。前年度に得られた、2週齢から連日メラトニン投与を受けた幼若個体の脳サンプルを用いて、免疫組織化学によりキスペプチン発現の解析を進めた。前年度に使用した抗キスペプチン抗体では特異的な染色像が得られなかったが、今年度新たに使用を始めた抗体では特異性の高い組織像が得られた。しかしながら、可視化できたのは神経線維に限られ、細胞体を確認できなかったためキスペプチンニューロン数の計測はかなわなかった。これは対象としている週齢でのタンパク発現量と局在を反映していると考えられる。そこで、細胞体の可視化のためin situ hybridizationに用いるRNAプローブの作製を進め、プラスミド精製までを終了した。また、発達期にメラトニンが作用しない状態を作り出すため、生後2週齢の動物に松果体摘除手術をおこなったが、サンプリングが困難であったため、今後は変則明暗周期によりメラトニンの絶対量、および分泌パターンを変動させる飼育条件下で生育したラットを用いて脳内のキスペプチン発現を解析する実験を進めていくよう計画している。