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Constrction and analysis of limbal niche in the corneal organoids

角膜类器官角膜缘生态位的构建与分析

基本信息

批准号：
21K09708
负责人：
比嘉一成
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Tokyo Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09708/
关键词：
オルガノイドニッチ角膜上皮

项目摘要

ヒト角膜上皮の幹細胞はこれまでに角膜中央部で幹細胞に匹敵する細胞の存在は報告されておらず、角膜周辺の輪部に限局し、角膜へ上皮を供給していると考えられている。我々はこれまでに角膜輪部組織から幹細胞と幹細胞を維持する環境であるニッチを分離し、マトリゲルを使ったオルガノイド培養を行うことで輪部機能を維持した長期培養を可能にしてきた。本研究の昨年度においては角膜中央部の上皮でも角膜上皮再生の細胞源として有用であるオルガノイドの作成に成功した。本年度においては作成したオルガノイドの評価を行った。輸入角膜の角膜組織をコラゲナーゼ処理し、上皮とその直下周辺組織を回収し、角膜輪部フェノタイプを維持するKGF+Y27632添加培地を用いてマトリゲルで培養した。オルガノイド中の未分化細胞を検出するため、コロニー形成能について比較検討を行った。また、培養1ヶ月後の形成したオルガノイドを輪部機能不全モデルウサギを作成し、移植後１週間後の組織の解析を行った。培養1ヶ月後において、角膜から作成したオルガノイドは輪部由来オルガのいどと同様にコロニー形成能を示すことがわかった。この角膜由来オルガノイドを輪部機能不全モデルウサギの輪部に移植を行ったところ、１週間後においてもヒト核を認識する抗体で移植部位に陽性像を検出することができた。中央角膜から作成したオルガノイドは輪部から作成したオルガノイドと同様にコロニー形成能を示したことから、角膜上皮再生の細胞源として有用である可能性が考えられた。今後はオルガノイドの上皮シートの作成能やさらに移植法の検討を行って、オルガノイドの機能の解析を行って行く予定出る。

In the central part of the cornea, there are some cells in the central part of the cornea, such as the central part of the cornea, the central part of the cornea. We need to make sure that the cornea department is responsible for the maintenance of the environmental protection system, so that it is possible to maintain a long-term training program. In this study, the central corneal epithelium, the corneal epithelial regeneration, the cell source, the useful epithelium, the central corneal epithelium, the corneal epithelial regeneration, the corneal epithelial regeneration, This year's budget has been completed in the first half of the year. In the cornea, the tissue of the cornea, the tissue of the epithelium, the tissue of the cornea, the KGF+Y27632 of the cornea, the tissue of the cornea The formation of undifferentiated cells is more efficient than the formation of undifferentiated cells. After 1 month of training, it will be possible for all the equipment to be made, and the tissue will be analyzed after 1 month of transplantation. After 1 month of incubation, the cornea and cornea were made to show that the formation of the cornea could show the origin of the disease. The origin of the cornea is that the machine can not complete the transplantation of the cornea. After 1 year, it can be used to detect the nature of the antibody transplant site. The formation of the central cornea can show the formation of corneal epithelium, the cell source of corneal epithelial regeneration and the possibility of corneal epithelial regeneration. In the future, we will be able to make sure that the operation of the transplantation method is effective, and that the mechanism can be used to analyze the data.