糖尿病性足壊疽に対する切り札-プロタミン含有創傷被覆材の開発-

对抗糖尿病足坏疽的王牌 - 含鱼精蛋白伤口敷料的开发 -

• 批准号: 21K09759
• 负责人: 梅山 広勝
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09759/
• 关键词: プロタミン; 創傷治癒; 創傷被覆材; 細胞毒性; エンドトキシン; 糖尿病性足壊疽; 抗菌作用; 創傷治癒促進

サケ白子由来タンパクであるプロタミンを用いた創傷被覆剤開発を進めている。昨年度の実験で、投与濃度の検証が行われ、それに引き続いてin vitroでの解析を行なった。マウスマクロファージであるRaw264.7を用いた刺激試験で、炎症性サイトカインの産生を認めたが、プロタミン高濃度での細胞毒性による細胞死が確認された。これは、プロタミンが陽電荷であることによる細胞の吸着が進むことによる生菌作用が細胞にも影響したためと考えられた。このため、特に至適濃度での濃度での投与が重要と考えられた。さらに、C3H／HeNおよびC3H／HeJマウスから採取した骨髄由来樹状細胞の刺激試験により、HeJマウスのサイトカイン産生がキャンセルされた。これは、TLR4を介した反応によるサイトカイン産生である可能性があり、プロタミン製剤のエンドトキシン含有の可能性が示唆された。そのため、エンドスペーシーキットでエンドトキシンの定量を行なったところ、エンドトキシン含有が判明した。今後、エンドトキシン吸着を行なった上でさらなる検証を進めていく予定である。プロタミンのエンドトキシン吸着は界面活性剤TritonX-114を用いて行う予定である。さらに、除去後の活性や創傷治癒効果をこれまでと同様の方法で行う。加えて、注射用製剤である硫酸プロタミンでも創傷治癒促進効果が認められるかを検証していく予定である。投与濃度に加えて、創傷治癒促進のメカニズムを明らかにし、創傷被覆材として使用する際に必要な事柄を探求していく。

我们目前正在使用精蛋白（一种源自鲑鱼MILT的蛋白质）开发伤口敷料。在去年的实验中，验证了给药的浓度，然后进行体外分析。在使用小鼠巨噬细胞RAW264.7的刺激测试中，观察到炎性细胞因子的产生，但是确认了由于细胞毒性高的细胞毒性而导致的细胞死亡。人们认为这是因为由于精蛋白的正电荷而导致细胞吸附的进展引起的可行细菌作用也影响了细胞。因此，在最佳浓度下的给药被认为特别重要。此外，对从C3H/HEN和C3H/HEJ小鼠收集的骨髓来源的树突状细胞的刺激研究取消了HEJ小鼠的细胞因子产生。这可能是通过TLR4介导的反应产生细胞因子的，这表明精蛋白制剂中内毒素的可能性。因此，当使用内部空间试剂盒定量内毒素时，发现它含有内毒素。将来，我们计划在内毒素吸附后进一步测试结果。计划使用表面活性剂TRITONX-114进行精蛋白的内毒素吸附。此外，去除后的活性和伤口愈合效果的方式与以前相同。此外，我们计划验证硫酸质硫酸质（一种可注射的制剂）是否具有伤口愈合促进作用。除剂量浓度外，我们还将阐明促进伤口愈合的机制，并在用作伤口敷料时探索必要的因素。