マウス胎仔皮膚再生過程における線維芽細胞の移動のメカニズムの解析

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B6.129X1-Twist2tm1.1(cre)Dorと/J、とactinを重合し遊走に関わる葉状仮足を形成する低分子量Ｇタンパク質であるRacをコードするexon内にlox-P siteを有し、Creレコンビナーゼを発現する細胞でRacをノックアウトすることができるSTOCK Rac1tm1Djk/Jマウスをそれぞれ増殖させ、当研究室で交配させた。2種のマウスは交配するに十分な数が確保できたので、交配行い出産させることが可能であった。しかし、計150匹の胎仔のGenotypingを行った結果、Twist2Cre-lox-Pともに入ったマウスは出生が認められなかった。引き続き、交配を続けるとともに、マウスを一度若いwild typeのものと掛け合わせ、若返らせたのちに、再び交配を試みることとした。さらに、2023年度で行う予定であった線維芽細胞のin vitroでの動態の観察をwild typeを用いた真皮actin cableの形成と、各発生段階の胎仔から採取した線維芽細胞を用いてscratch assayを行い、細胞の遊走、収縮などの動態の変化を観察した。すなわち、マウスの胎仔真皮より線維芽細胞の初代培養を行い、2次元培養下scratch assayでのactin cableの形成、または偽足の形成を確認した。また、RacからRhoへの切り替えを引き起こす低分子化合物を投与することで、線維芽細胞でactin cable形成や遊走を制御できるか否かを観察した。