口腔がんエピゲノム異常遺伝子の網羅的解析とエピゲノム薬による腫瘍抑制効果の検証

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本邦における口腔がん全体の原発巣再発率は13～30％で、口腔がん全体の5年生存率は60～70%であることから、治癒率向上のための新規治療法の開発が望まれる。本邦では、骨髄異形成症候群と皮膚T細胞性リンパ腫に対し、DNAメチル基転移酵素阻害剤（DNMTi）とヒストン脱アセチル化酵素阻害剤（HDACi）によるエピゲノム薬治療が臨床応用されているが、口腔がんへの応用には至っていない。本研究では、口腔がんのDNAメチル化異常とヒストンアセチル化異常の解析を行うことでエピゲノム異常遺伝子の同定を行い、DNMTiとHDACiの腫瘍抑制効果を検証する。今年度は昨年度の5-Azacytidineから、より毒性が低く化学的安定性が高いZebularine(Zebu)に変更し細胞培養実験を行った。高分化型舌扁平上皮癌細胞株HSC4を用いてDNMTiのZebuおよびHDACiのValproic acid(Vpa)添加によるHSC4の細胞増殖抑制を検討した後、HSC4にZebuとVpaを共添加し7日間培養を行い、次世代シーケンサーによるRNA発現網羅的解析を行った結果、対照群と比較し発現上昇を示した遺伝子の上位にがん抑制遺伝子CNTN4が確認された。次に、がん抑制遺伝子p16,p21,RASSF1,NPY ,CNTN4について定量的RT-PCR法を行った結果、Zebu・Vpa共添加群において有意なmRNA発現上昇を認めた。これらの遺伝子について定量的メチル化特異的PCR法を行った結果、Zebu・Vpa共添加群でのDNAメチル化率の有意な低下を認め、ZebuのDNA脱メチル化作用がmRNA発現上昇に影響したことが確認された。またin situ HDAC activity assayの結果、Zebu・Vpa共添加群において有意なHDAC活性低下を認め、Vpaの作用が効果を示したことが確認された。