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機能的スクリーニングから独自に選出した新規microRNAによる口腔癌治療の開発

使用从功能筛选中独特选择的新型 microRNA 开发口腔癌治疗方法

基本信息

批准号：
21K10140
负责人：
上杉篤史
金额：
$ 2.41万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K10140/
关键词：
microRNA 口腔癌網羅的スクリーニング Drug Delivery System

项目摘要

本研究は、新たな癌治療法として癌抑制遺伝子型microRNA replacement therapyの確立を目標としている。合成二本鎖microRNA(ds-miRNA)ライブラリーを口腔癌細胞株に遺伝子導入することで機能的スクリーニングを施行する。選出した候補microRNAに対し、その本来の発現状態を調べ、分子機序の総合的解析を行う。分化を誘導した正常粘膜由来不死化細胞RT7および口腔癌細胞株NA、SAS、SKN3に対し、327種類の合成ds-miRNAが搭載されているライブラリー（Ambion社）を使用し、各細胞株に網羅的に遺伝子導入を行い、各細胞株におけるin vitroでの細胞増殖状能をMTT法で数値化した。分化を誘導した正常粘膜由来不死化細胞RT7では細胞増殖抑制活性がなく（cut off値≧0.70）、かつ口腔癌細胞株NA、SAS、SKN3では細胞増殖抑制活性がある（cut off値<0.50）条件で絞り込みを行ったところ20種類のmicroRNAが選出された。さらに口腔癌において新規性のあるmicroRNAに注目し、Pub Medを使用し文献的な検索を行ったところ、8種類のmicroRNAが選出された。分化を誘導した正常粘膜由来不死化細胞RT7および口腔癌細胞株からRNAを抽出し、選出されたmicroRNAの発現解析を行ったところ、RNAレベルで癌細胞において特異的に発現が低下している2種類のmicroRNA-XとmicroRNA-Y (laboratory name)が選出された。これらのmicroRNAを、各細胞株へLipofectamine RNAiMAX(Invitrogen社)を用いて遺伝子導入後、in vitro細胞増殖状態をMTT法で数値化し評価したところ、口腔癌細胞株NA、SAS、SKN3以外の細胞株でも強い細胞増殖抑制活性を認めた。

In this study, the new method of cancer treatment is to determine the target of cancer suppressor subtype microRNA replacement therapy. The microRNA (ds-miRNA) cell line of oral cancer was synthesized and transferred into the cell line of oral cancer cell line. Select the analytical line for the candidate microRNA data, the current status of the host computer, and the molecular sequence match. The differentiation leads to the immortalization of the normal mucosa of RT7 cell lines NA, SAS, SKN3 cancer cell lines NA, SAS, SKN3 cancer, 327 synthetic ds-miRNA cell lines (Ambion), the introduction of the genes of each cell line into the cell line, and the cell colonization of each cell line can be quantified by MTT assay. The differentiation of normal mucosa resulted from the immortalization of RT7 cells. The colonization inhibition activity of oral cancer cell lines NA, SAS and SKN3 cell lines NA, SAS and SKN3 cell lines were selected from the microRNA of cell cycle 20. The cell colonization inhibition activity was selected under the condition of cell cycle and cell cycle. The new standard of microRNA for oral cancer, the index of the literature for Pub Med, and the microRNA for cancer of the oral cavity were selected. The differentiation of normal mucosa leads to the immortalization of the normal mucous membrane of RT7 cells, oral cancer cell lines, RNA cells, microRNA cells, RNA cells, microRNA-X cells, oral cancer cells, oral cancer cells, oral The cell lines of microRNA, Lipofectamine RNAiMAX (Invitrogen) were introduced with spores, and the colonization inhibition activity of cell lines other than NA, SAS and SKN3 was confirmed by in vitro colonization MTT method.