硬組織のエピジェネティックな加齢変化の評価と年齢推定への応用

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2022年度はまず2021年度中に準備した石灰化培地培養後の各時間経過後の細胞株（歯根表面の細胞由来）検体を用いてメチル化アレイを実施した。その結果、過去に抜去歯歯根表面の検体で年齢との関連が確認できた１ターゲットについては培養細胞でも石灰化誘導によってメチル化率がわずかに高くなる傾向が認められた。メチル化アレイは１検体での検証であったため、メチル化アレイ結果についてリアルタイムPCRを用いて複数回確認すべく培養細胞でのプライマー条件を検討中である。また、細胞培養系にメチル化抑制剤を添加した群では細胞数増加および細胞石灰化が抑制された。これまでの検証では、培養細胞の石灰化関連因子の発現はメチル化抑制剤の添加により増強するものと減弱するものが認められている。メチル化抑制により発現に影響を受ける石灰化関連因子の有無について検証を進めている。抜去歯検体については、新たに18検体の単純エックス線撮影画像を用いて組織学的計測後にDNAを抽出した。一方で、解析に用いている大臼歯は検体入手が比較的容易であるが基本的に複数根を有していることから単根の歯と比較して歯髄腔の形態もより複雑である。象牙質と歯髄腔の比を単純エックス線撮影画像では適切に評価できないことから、少なくとも歯髄腔については今回の検討から除外することとした。これまで実施してきた過去の抜去歯のメチル化スコアデータに、検体の歯槽骨吸収程度を情報に加えて再度解析を行ったところ、メチル化ターゲットのスコアに加えて歯槽骨吸収の程度も影響を与えていることが示唆された。