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Crosstalk between Netrin-1 and BMP regulates the invasion and metastasis of melanoma

Netrin-1与BMP的串扰调控黑色素瘤的侵袭和转移

基本信息

批准号：
21K10260
负责人：
本田尚郁
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kyushu Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K10260/
关键词：
悪性黒色腫 BMP Netrin Netrin-1 メラノーマ

项目摘要

悪性黒色腫は皮膚や口腔を含む粘膜に発症する悪性腫瘍であり，早期より全身転移するため予後が悪い．Netrin-1は神経細胞の軸索を誘引する液性因子として同定され，多くの悪性腫瘍でNetrin-1の発現量が上昇し，さらにNetrin-1が腫瘍細胞の遊走・浸潤を促進することが報告されている．Netrin-1と受容体のDCCではメラノーマ細胞の挙動において相反した作用を持つが，そのメカニズムの解明は不十分であり，さらに他のNterin-1受容体，すなわちDSCAMやNeoを対象とした研究も進んでいなかった．そこで実験的にNetrin-1の過剰発現でBMPの補助受容体としても知られるNeoの発現が上昇し，またNtrin-1の過剰発現はBMPが誘導するId-1のレポーター活性を濃度依存性に亢進させた．さらに今年度は実験対象を若干拡大させて，Src シグナルの制御因子に着目してその悪性黒色腫の機能を解析した. Srcシグナルの調節因子plectin遺伝子が欠損したマウス悪性黒色腫細胞株B16細胞（PKO）を作製し，ヌードマウスにPKOを接種し2週間後形成された腫瘍を形態学・組織学的に解析した．するとPKO腫瘍細胞の密度は低く，H＆E染色ではPKO腫瘍の細胞間隙は広く疎な像であった．同様にPKO細胞から形成されたスフェロイドでは凝集密度が低下し，PKOの細胞塊は機械的刺激によって容易に崩壊した．また，フィブロネクチンに対する接着能も低下した．さらに，PKOの細胞増殖能をWST-8法およびCell viability法で評価したところ，PKOは経時的な生細胞数の増加能が低下していた．Western botting法と免疫沈降法により解析すると，PKOではSrcシグナル活性が低下していた．

Netrin-1 is a fluid factor that induces axons in nerve cells. Netrin-1 expression increases in most of the lesions. Netrin-1 promotes migration and infiltration of tumor cells. Netrin-1 and DCC of receptor have opposite effects on migration and infiltration of tumor cells. Netrin-1 and DCC of receptor have different effects on migration and infiltration of tumor cells. Netrin-1 and DCC of receptor have different effects on migration and infiltration of tumor cells. In addition, the expression of Neo in the protein receptor of BMP increased in response to Netrin-1, and the activity of BMP in response to Netrin-1 increased in a concentration-dependent manner. This year, we have implemented a number of major changes in the control factors of Src, which are related to the analysis of the functions of the black pigment. The expression of plectin gene was detected in B16 cells (PKO) and the morphological and histological analysis of the tumor was carried out after 2 weeks of inoculation. The density of PKO tumor cells is low, and H & E staining shows that PKO tumor cells are isolated from the tissue. In the same way, PKO cell mass formation and aggregation density are low, PKO cell mass is easy to collapse due to mechanical stimulation. The next step is to lower the temperature. In addition, PKO cell proliferation activity was evaluated by WST-8 method and Cell viability method, and PKO cell proliferation activity decreased during PKO culture. Western bottling method and immunosedimentation method were used to analyze PKO cell proliferation activity.