死体体液中のexosome内包miRNA解析を用いた死因解明への実験的検証

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Exosomeは、細胞から分泌されるナノサイズ(直径50-150 nm)の細胞外微粒子である。核酸やタンパク質などを含有し、様々な疾患の病態形成に関わっている。脂質二重膜に囲まれ、体液中に安定して存在していることより、臨床現場ではバイオマーカーとしての応用が期待されている。法医学分野においても、死体体液中Exosomeの内包物の解析により、死亡に至る病態変化を得られる可能性がある。特にExosomeに内包されている非コードRNAであるマイクロRNA (miRNA)は、標的とする複数のmRNAの調整に関わることより、Exosomeの機能に重要である。本研究は、①解析に用いる剖検体の有用な試料、②体液中のExosome及びその内包物の安定な期間及び環境温度、③死体体液中のExosome内 miRNAの解析により、生体で既に報告されている疾患特異的なExosome中miRNAの変化との比較と確認、④死因特異的miRNAの探索及び剖検試料を用いた実証、この4点を中心に実験を進める計画である。今年度は目標の中の③を中心に実験を進めた。体液の中でも、血液はExosomeを多く含有していることも知られている。前年度の研究において、血液中Exosome及びExosome含有miRNAは、環境中温度に依存するものの、20℃及び4℃保存では数日間、体液中に安定して存在している可能性が示唆された。それらの安定性実験の結果を基に、安定性の確保された環境中温度で死後2日以内の解剖体から採取した血液を実験試料として用いた。急性心筋梗塞は、法医学分野で重要である心臓突然死の最も一般的な原因の一つでもある。そこで急性心筋梗塞を対象とし、急性心筋梗塞で死亡した剖検体の血液中のExosomal miRNAの網羅的解析を行い、急性心筋梗塞特異的なmiRNAの検出が可能か、検討した。