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力学刺激が活性化するプロテインキナーゼ群による初期胚外胚葉の間葉上皮転換様制御

机械刺激激活的蛋白激酶对早期胚胎外胚层的间充质-上皮转化样调节

基本信息

批准号：
20K06663
负责人：
木下典行
金额：
$ 2.66万
依托单位：
National Institute for Basic Biology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

アフリカツメガエル原腸胚の外胚葉にストレッチ刺激を与えるとタンパク質リン酸化に大きな変化が現れることを、質量分析によるリン酸化プロテオミクス解析により見出した。その中でもタイトジャンクションの構成タンパク質のリン酸化が大きく変化していた。本研究では、機械刺激によってリン酸化状態が変化するタンパク質として、タイトジャンクション構成タンパク質の一つであるZO-1タンパク質に注目した。ZO-1タンパク質は、刺激によりリン酸化されるとともに、細胞内局在も変化する。すなわち、刺激前は細胞質で顆粒状に存在し、刺激によりタイトジャンクションへと移行することがわかった。興味深いことに、ZO-1の細胞質顆粒は、液液相分離（LLPS）によって形成されることも確認された。ZO-1の細胞質顆粒は、アフリカツメガエル胚だけでなく、マウス胚や培養細胞系でも力学刺激依存的なLLPSが観察された。現在、近位依存的ビオチン化のシステムを用いて、細胞質顆粒内でZO-1と共局在するタンパク質の同定を開始している。ビオチン化酵素遺伝子をZO-1遺伝子と融合し、細胞質顆粒とタイトジャンクションに局在させた時にビオチン化されるタンパク質を質量分析により同定し、細胞内局在による違いを解析する手法である。予備的な結果であるが、候補タンパク質には複数のプロテインキナーゼタンパク質が含まれており、今後確認実験を行なっていく予定である。

The original embryo, the ectoderm, the stimulation, the acidification, the acidification, the quantitative analysis, the stimulation, the acidification, the acidification, the quantitative analysis. In the middle of the day, there is a lot of room temperature in the middle of the world. In this study, mechanical stimulation, mechanical stimulation, acid treatment, acidification, acid treatment, acid treatment, acidification, acidification, acidification. ZO-1, stimulation, acidification, cytokinesis, and intracellular activation. Before stimulation, the presence of granules, the presence of cells, the presence of particles, the presence of granules, and the presence of granules before stimulation. Deep flavor, ZO-1 cell size, liquid-liquid phase separation (LLPS) and liquid-liquid separation (LPLD) were used to confirm the formation of the product. ZO-1 cell culture, cell culture, mechanical stimulation-dependent LLPS observation. At present, the proximity-dependent system is used in the system, and the cellular ZO-1 system is the same as the beginning of the system. The enzyme enzyme ZO-1 was fused, the cell DNA was fused, and the cell was analyzed in the same way as in the cytosol. The results of the device are not valid, and you are waiting for the number of copies to be replicated. Please confirm that you will not be able to do so in the future.