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Regulation of cell differentiation by novel autophagy regulators

新型自噬调节剂对细胞分化的调节

基本信息

批准号：
20K06672
负责人：
山田葉子
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Sophia University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K06672/
关键词：
細胞分化オートファジー細胞性粘菌進化発生胞子

项目摘要

KnkA, Bcas3のオートファジーと細胞分化における進化的変遷を明らかにする目的で、これまで用いたDictyostelium discoideum (Ddis)と系統の異なるPolysphondilium violaceum (Pvio) のknkA, bcas3遺伝子破壊株、P. pallidum (Ppal) knkA遺伝子破壊株を作成し表現型解析した。Ppal bcas3は遺伝子破壊とゲノム編集を繰り返し試みたが成功していない。表現型解析から、柄分化についてDdisと共通した異常が見られる一方、胞子形成には必須でないなど、Ddisとの違いも見られた。一方、マウス及びシロイヌナズナのknkA, bcas3オーソログをそれぞれのDdis遺伝子欠損株に導入したところ、予想に反し表現型の相補が見られなかった。外来タンパク質とDdis knkAまたはbcas3との相互作用に問題がある可能性を考え、DdisのknkA, bcas3二重欠損株を作成しシロイヌナズナの両遺伝子を発現させたが、依然として表現型は相補されず、他の機能分子との相互作用に種特異性があることが示唆された。また、オートファジー調節因子の分解を任意に調節する目的でオーキシン誘導デグロンタグ付加タンパク質の分解を試みたが、上手くいっていない。そこで、大腸菌のジヒドロ葉酸還元酵素(eDHFR)をデグロンとしたシステムを試みている。分化誘導シグナル、cAMPの受容体結合タンパク質を同定する目的で、Ddis cAMP受容体遺伝子に変異型BirAビオチンリガーゼを挿入した株を作成し、cAMPに応答して特異的にビオチン化されるタンパク質をウエスタンブロット解析した。条件検討の結果、多数の非特異的ビオチン化たんぱくに加えて特異的にビオチン化されたと思われるバンドが検出されている。

For the purpose of clarifying the evolutionary changes of KnkA, Bcas3 and cell differentiation, we used the knkA, Bcas3 gene strain and the P. pallidum (Ppal) knkA gene strain of Dictyostelium discoideum (Ddis) and Polyphondilium violaceum (Pvio) to perform phenotype analysis. Ppal bcas3 is a successful compilation of the original text. Phenotype analysis, stem differentiation, common abnormalities, one side, spore formation, necessity, Ddis, violation A party, a party and a party. A study on the possibility of the interaction between foreign molecules and Ddis knkA, bcas3, and their phenotypes. The resolution of regulatory factors is arbitrary. The resolution of regulatory factors is arbitrary. In addition, E. coli and E. coli folate reducing enzyme (eDHFR) were tested in the study. For the purpose of differentiation induction, cAMP receptor binding, isoform analysis, cAMP receptor binding, isoform analysis, and differentiation induction, cAMP receptor binding, isoform analysis, and cAMP receptor binding were performed. As a result of the conditional search, most of the non-specific search results were added to the specific search results.