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卵巣明細胞癌の抗癌剤耐性関連新規バイオマーカー：ＥＢＰ５０の同定とその機能解析

卵巢透明细胞癌抗癌耐药相关的新型生物标志物：EBP50的鉴定及其功能分析

基本信息

批准号：
20K07397
负责人：
松本俊英
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Kitasato University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

2022年度はEBP50（Ezrin-radixin-moesin-binding phosphoprotein-50）とPARP1の結合証明及び機能解析に着手した。前年度の免疫沈降法とショットガンプロテオミクス法を組み合わせた実験結果より、EBP50とDNA修復酵素であるPARP1分子が結合する可能性が示唆された。改めてEBP50細胞質発現を示す卵巣明細胞癌細胞株OVISEで免疫沈降及びWestern blot法により解析したところ、両者の結合を示すバンドが得られた。また、GSTタグ融合タンパク質を作製し、Pull-down assayを実施したところ、EBP50のPDZ1ドメインがPARP1と結合部位であることが明らかとなった。さらに、病理検体を用いた蛍光二重染色においても同様の結果が得られた。次にOVISE細胞を用いて、抗癌剤（CDDP及びPTX）処理後にタンパク質を細胞局在毎に分画しWestern blotを行ったところ、EBP50は抗癌剤刺激により核内へ移行することが明らかとなった。また、EBP50がPARP1と結合する意義について検討したところ、EBP50ノックダウン系細胞においては、clearved PARP1の増加及びDNA修復能が低下することが分かった。以上より、EBP50はPARPのタンパク質発現安定化及び活性化維持に関与していることが示唆された。次年度は、臨床検体を用いた証明と予後への影響について解析する予定である。

In 2022, we started to prove the combination of EBP50 (Ezrin-radixin-moesin-binding phosphoprotein-50) and PARP1 and analyze its functions. The results of the previous immunoprecipitation assay showed that EBP50 and PARP1 molecules could bind together. EBP50 cytoplasmic expression was demonstrated by immunoprecipitation and Western blot analysis of the EBP50 cytoplasm. GST-fusion assay control, Pull-down assay, EBP50 PDZ1, PARP1, binding site The results of the double staining were obtained. OVISE cells were treated with anti-cancer agents (CDDP and PTX), and the cells were treated with anti-cancer agents (CDDP and PTX). EBP50 and PARP1 binding significance, EBP50 and PARP1 binding significance. The above, EBP50 PARP quality development stabilization and activation maintenance related to the middle of the display The next year, the clinical model was used to prove the impact of the analysis.