p68の肝癌細胞及び肝癌血管内皮細胞における機能解析

p68在肝癌细胞及肝癌血管内皮细胞中的功能分析

• 批准号: 20K08392
• 负责人: 野尻 俊輔
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K08392/
• 关键词: ｐ68; 肝発癌; p68; 肝癌; 血管内皮細胞

細胞培養実験と動物実験を並列で進めている。細胞培養実験 ：まず3種類のヒト培養細胞の培養を始めた。ヒト内皮細胞培養はヒト臍帯静脈由来血管内皮細胞(HUVEC)を正常内皮細胞として使用し、ヒト星細胞(LX-2).ヒト平滑筋細胞(PCS-100)を星細胞はMEM溶液で、平滑筋細胞は専用培地にて培養した。培養状態は比較的良好で継代に成功している。次にヒト内皮細胞におけるp68 の強制発現及びノックダウンを試みた。HUVEC細胞を使用しp68強制発現とsiRNAによる遺伝子ノックダウンを施行した。両者ともヒト肝細胞で使用したものを同じプロトコールで使用した。強制発現、ノックダウンともに肝細胞使用時に比べ効率が悪く条件を変えて試行したが発現変化による変化を見るのに十分な状態には至っていない。引き続き現在十分となる効果が得られる条件を検索中である。強制発現系では細胞間による発現効果の差が激しく安定した効果が得られにくいため、siRNAでのノックダウンが十分であれば正常細胞とノックダウンでの差で実験を進めることとする。効果が十分であることを確認したのちに網羅的遺伝子解析を施行したい。コンディショナルノックアウトマウス（cKOマウス）の作製はfloxp/p68のホモF1マウスとAlb-CreホモF1マウスを交配させcKOマウスを選別することに成功した。実際に出来上がったKOマウスを使用し肝臓でのp68KOを確認したのちホモでの継代を継続することに成功している。DENとCCl4の腹腔内投与による肝発癌を誘発するため現在投与観察中である。またDEN単独投与での発癌も文献では多数報告されているため両方法で進めているがDEN飲水法による発癌が一番ばらつきが少なく現在同方法にて発癌進行中である。3か月以内には網羅的解析に進めると予定している。

Cell culture and animal culture are the most important aspects of cell culture. Cell culture process: 3 kinds of cell culture process. Endothelial cell cultures include umbilical vein-derived vascular endothelial cells (HUVEC) and normal endothelial cells. The smooth muscle cells (PCS-100) were cultured in MEM solution. The cultivation status is relatively good and the generation is successful. The stress of p68 in endothelial cells and the stress of p68 in endothelial cells were studied. HUVEC cells were exposed to p68-induced siRNA. The liver cells are used in the same way. Stress occurs, changes occur, changes occur. The result is that there is no way to get rid of it. The stress response system is the difference between the cellular response and the stability response. The response is the difference between the cellular response and the siRNA response. The response is the difference between the cellular response and the siRNA response. The result is that the analysis of all the genetic information is carried out. The process of selecting the floxp/p68 and the Alb-Cre/F1 is successful. In the meantime, we're going to use the p68KO to confirm that we're successful. CCl4 is administered intraperitoneally to induce liver cancer. In the literature, most of the reports were published on the method of drinking water, and the cancer was detected by the same method. 3 months ago, the analysis of the net was carried out.