New approach for the mechanisms of septic encephalopathy based on cyclophilin D signal transduction and mitochondrial permeabilty transition pore structure

基于亲环蛋白D信号转导和线粒体通透性转换孔结构的脓毒症脑病机制新途径

• 批准号: 20K09255
• 负责人: 内野 博之
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Tokyo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K09255/
• 关键词: シクロフィリンD KOマウス; ミトコンドリア; マイトファゴソーム; 敗血症性脳症; CyclophilinD KO マウス; 酸化ストレス; Cyclophilin D KOマウス; NRF2; microRNA; Protein array; サイトカイン; ケモカイン; 敗血症関連脳症; ミトコンドリア機能不全; シクロフィリンD; MPT pore; 電顕

ミトコンドリア選択的なオートファジーであるmitophagyの検証と役割の検討を主たる目的とした。SAE誘発における脳マイトファジー形成の検証とCypD情報伝達系のマイトファジー発現に果たす役割の解明について第8-10週令の雄性C57B6マウスのwild群、CypD KO群を用いてSAEモデルを作製し、モデル作製６、１８時間後（各時間・両群、各群のshamとも５匹ずつのマウスを使用）に4℃ ２％パラホルムアルデヒド＋2.5%グルタールアルデヒド添加0.1Mリン酸バッファー溶液で灌流固定する。大脳（視交叉より2mm後方）の冠状断面で２ｍｍの切片を切り出し、3%グルタールアルデヒド＋1%リン酸バッファー4酸化オスミウムにて固定後にエポン包埋し0.12mmで薄切切片を作成し、0.2%クエン酸鉛+1%酢酸ウランにて染色した後に走査電顕にてマイトファゴソーム形成の有無を解析を行った。抗LC3B抗体と抗p62抗体を用いたimmunoblottingを行い、デンシドメトリーにてLC3-II(脂質修飾型)/LC3-I比（マイトファゴソーム形成・量を反映）、p62の減衰スピード（分解能を反映）を評価し、SAE誘発・脳マイトファジー形成を検証・定量化し、CypD情報伝達系のマイトファジーに果たす役割を解明することも同時に行う予定とした。

The purpose of this is to conduct mitophagy verification and service cut verification on the remote control of the device. C57B6 male C57B6 female C57B6 male C57B6 male C57B6 female C57B6 male C57B6 female C77B6 male C77B6 male C7C7B6 female C7C (Each time·group, each group of sham 5 A coronal section of 2mm in diameter (2mm behind the optic chiasm) was cut out, 3% of which was fixed and embedded in 0.12 mm of thin section after acidification. After staining with 0.2% of lead acetate and 1% of acetic acid, the presence or absence of the formation of the electric field was examined and analyzed. Anti-LC3B antibody and anti-p62 antibody were used in immunoblotting, determination of LC3-II/LC3-I ratio, evaluation of attenuation of p62, identification and quantification of SAE induction, detection and quantification of CypD information, and determination of CypD information.

项目成果

敗血症関連脳症発症におけるCyclophilinD遺伝子欠損マウスを用いた脳内サイトカイン発現の検証

使用亲环素 D 基因缺陷小鼠验证脑部细胞因子表达在脓毒症相关脑病发生过程中的作用

• 发表时间: 2021
• 作者: 小林賢礼;河内文;魚島直美;柴田勝一郎;石田裕介;藤田英俊;中島利博;内野博之
• 通讯作者: 内野博之